紫丁香蘑液体发酵海藻糖的提取纯化及应用研究

摘要

紫丁香蘑(Lepista nuda)为伞菌目，白蘑科，香蘑属的一种药食皆用的野生真菌。目前，对紫丁香蘑的林地栽培获得子实体的试验进行了研究，而对紫丁香蘑的液体发酵及有效成分的提取研究的比较少。食药用菌中占70％以上的游离糖和游离糖醇是由一二种糖和糖醇组成的，紫丁香蘑中主要以海藻糖为主，含量较高。海藻糖可应用于食品、医药、化妆品等多方面的研究。我国食用菌资源丰富，借助食用菌开发海藻糖具有独特的优越性。本文对液体发酵紫丁香蘑海藻糖的提取、纯化、鉴定以及应用进行研究。本研究主要试验结果如下： 1.以菌丝体干重和海藻糖的含量为测定指标，确定紫丁香蘑液体发酵培养基的组成。试验得出，最适氮源为酵母膏，碳源为葡萄糖，最初pH值为7.0。 2.紫丁香蘑菌丝体最佳提取工艺参数研究。通过对紫丁香蘑菌丝体进行单因素和3因素3水平的正交试验，研究提取时间、温度、乙醇浓度对紫丁香蘑菌丝体海藻糖提取的影响。影响提取的各因素顺序：温度>乙醇浓度>提取时间。最佳提取参数最优组合为A2B1C2，即提取时间为1h，温度为70℃，乙醇浓度30％。得到的海藻糖的含量为12.92％，蛋白含量0.62％。 3.海藻糖的纯化。采用Sevag法除蛋白。Sevag法中海藻糖溶液与氯仿-正丁醇溶液的比例不同时，不但对蛋白去除率有影响，而且对海藻糖的损失程度也不同，综合考虑，最后确定除蛋白的最佳海藻糖溶液与氯仿及正丁醇的体积比为5：1：0.25。通过测定蛋白含量，从而选择了除蛋白的次数为二次，经二次除蛋白后的海藻糖溶液中的蛋白含量为0.3％。通过单因素和4因素3水平试验，对除蛋白后的海藻糖溶液进行活性炭脱色，活性炭脱色的最佳工艺为：调节pH值为4，加入3％的活性炭，60℃下搅拌10min，脱色率达到72.04％，海藻糖含量为8.06％。脱盐的最佳工艺条件为：1mL/min，pH值6，此时脱色率在90％以上，脱盐率在97％以上。 4.薄层层析鉴定海藻糖。通过在不同的展开剂中Rf值的测定，确定展开剂为正丁醇：吡啶：水=15：3：2，点样量1.0ul，硫酸和甲醇配制成1：4的溶液，105℃的干燥箱中加热使之显色。结晶海藻糖得率为2.24％，海藻糖含量92.56％。 5.海藻糖应用的研究表明，海藻糖具有一定的抗冷冻和抗疲劳作用。在抗冷冻方面，通过观察不同时间鱼糜色泽、气味、水质三个因素的变化。在抗疲劳方面，海藻糖对小鼠游泳试验、爬绳试验、肝糖原、血清尿素氮都有显著影响。

目录

文摘

英文文摘

声明

1前言

1.1紫丁香蘑的简介

1.1.1紫丁香蘑分类地位及其在自然界的分布

1.1.2紫丁香蘑的药用价值

1.1.3紫丁香蘑的研究进展

1.2海藻糖的概况

1.2.1海藻糖的理化性质及其存在

1.2.2海藻糖的生物活性

1.2.3海藻糖的生产与制备

1.2.4海藻糖的保护作用

1.2.5海藻糖的应用

1.3选题目的及意义

2材料与方法

2.1材料与试剂

2.1.1供试材料

2.1.2主要试验试剂

2.2主要试验仪器

2.3试验方法

3结果与分析

3.1紫丁香蘑液体发酵培养基的优化

3.1.1碳源对紫丁香蘑液体发酵海藻糖的影响

3.1.2氮源对紫丁香蘑液体发酵海藻糖的影响

3.1.3培养基初始pH值的筛选试验

3.2紫丁香蘑菌丝体海藻糖提取工艺研究

3.2.1单因素条件对海藻糖提取的影响

3.2.2正交试验结果与分析

3.2.3子实体和菌丝体中的海藻糖及蛋白质含量的比较

3.3蛋白质的去除

3.4活性炭脱色试验结果与分析

3.4.1单因素条件对脱色的影响

3.4.2正交试验结果与分析

3.5流速和PH值对离子交换脱色脱盐的影响

3.6结晶海藻糖制品薄层分析

3.7海藻糖应用初步研究

3.7.1冷冻保护作用的初步研究

3.7.2在抗疲劳方面的应用

4讨论

4.1液体发酵培养基的筛选

4.2海藻糖提取与纯化方法的探讨

4.3海藻糖的应用

5结论

参考文献

致谢

个人简历