人类锌指蛋白家族新基因ZNF394的克隆、表达及其功能研究

摘要

为了了解对心脏发育和疾病有关的新基因,我们通过扩增人类心脏文库发现了一个SCAN(LER)框的锌指蛋白新基因,通过国际基因命名委员会命名为ZNF394.ZNF394全长2180个碱基,含有一个长为1686个碱基的开放阅读框,编码为561个氨基酸的蛋白质,蛋白质分子量大约为64千道尔顿,位于染色体7q11.21.该基因在N端含有一个高度保守的SCAN型结构域,相邻一个KRAB框型结构域,并且在其C端具有非常保守空间的7个连续的C2H2型锌指结构单元,通过对人类成体组织进行Northern杂交,得到一个大约为2.18 KB的转录本,该转录本存在于心脏、肌肉组织和脑组织,表明锌指蛋白基因ZNF394在人类成体组织中的心脏、脑和肌肉组织中有较特异的表达.通过人工合成多肽,免疫新西兰大白兔,获得多克隆抗体,进行人体胚胎染色,发现锌指蛋白基因ZNF394在胚胎中的心脏组织有表达.通过构建增强型绿色荧光蛋白(Enhance green fluorescent protein,EGFP)与ZNF394融合基因的真核表达载体EGFP-N1-ZNF394,转染COS7细胞系,在COS7细胞核中检测到较强的绿色荧光,而重组质粒pCMV-tag2A-ZNF394在细胞中的过表达能抑制c-Jun和AP-1基因的作用.结果表明新基因ZNF394可能是MAPK信号转导途径的一个转录抑制子,并对人类的心脏发育可能具有重要的调控作用.

目录

文摘

英文文摘

英文缩写词表

第一章前言

第二章文献综述

2.1锌指蛋白基因家族

2.2锌指蛋白基因的结构和功能

2.3锌指蛋白基因在心脏发育过程中的作用

2.4结论

第三章新基因ZNF394的结构特征及与小鼠同源基因RLZF-Y结构的比较

3.1生物信息学软件

3.2 ZNF394的一级结构

3.3 ZNF394蛋白质二级结构的分析

3.4 ZNF394与小鼠基因RLZF-Y的结构域比较

第四章人类锌指蛋白新基因ZNF394的克隆及其表达的研究

4.1材料与方法

4.2实验方法

4.3实验结果

4.4讨论

第五章新基因ZNF394功能的初步研究

5.1实验材料及方法

5.2结果及其分析

5.3讨论

结语

参考文献

附录

致谢

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