鼠病毒MHV68研究新探

摘要

鼠病毒MHV68(Murine Herpesvirus68)隶属γ疱疹病毒。γ疱疹病毒与恶性肿瘤的发生密切相关，如EBV(Epstein-Barr virus)与鼻咽癌和Burkitt's淋巴瘤;KSHV(Kaposi's sarcoma-associatedherpesvirus)则是引起卡波氏肉瘤(Kaposi's sarcoma，KS)的直接病因，它的基因组几乎可在所有卡波氏肉瘤中被检出。EBV及KSHV极少能感染灵长类以外的物种;目前也没有适合这两种病毒感染和复制的细胞模型，因此寻找一个替代的研究模型显得十分必要。MHV68恰好符合这个研究模型的要求:MHV68的基因组中约78％的开放阅读框与KSHV和EBV同源，且能感染实验小鼠，在体外能感染多种细胞，包括各种哺乳动物的上皮细胞系和成纤维细胞系。
　　近年来，斑马鱼作为一种重要的模式生物得到了广泛的应用，特别是在胚胎发育机制及各种人类疾病的研究中。相比于小鼠，斑马鱼在科学研究中又有许多独特的优势，比如成本低、对人体和环境无害、容易获得、易于在实验室饲养和繁殖、子代多等。然而，目前尚未有采用斑马鱼研究MHV68的报道。
　　本研究采用斑马鱼受精卵、ZF4细胞、IKKα敲除的MEF(MouseEmbryonic Fibroblast)细胞(MEF/IKKα-/-)，乳仓鼠肾细胞(BHKcells，Baby Hamster Syrian Kidney)作为感染对象，得到一系列实验结果，具体研究内容和研究结果如下:
　　1、斑马鱼受精卵被MHV68感染后，出现了胚胎发育延迟的现象。感染过的斑马鱼受精卵发育成熟后，提取基因组DNA，在其中检测到了MHV68的基因片段。在胚胎发育各阶段，用Q-PCR检测了发育相关基因和免疫相关基因的表达变化，发现仅有转化生长因子β1(Transforming growth factorβ1，TGFβ1)在实验组（感染了MHV68的斑马鱼受精卵）中的表达比对照组低，而其它发育及免疫相关基因:FGF3、IFNθ1、IFNθ3、ISG15、TNFα，以及细胞质病毒DNA感受因子:DDX41、DHX9、cGAS和MAVS在实验组和对照组中没有明显区别。
　　2、IKKα敲除的MEF细胞被MHV68感染后，通过比较，其病毒噬斑大小都要小于其他细胞，包括MEF/IKKα-/-/IKKα等，可以得出结论:IKKα有助于MHV68感染MEF细胞。
　　3、BHK细胞用青鱼Ⅰ型干扰素a(bcIFNa)处理后，用MHV68感染发现:300微升bcIFNa预处理的BHK细胞中产生的病毒噬斑数量要比用100微升bcIFNa处理和对照处理的少，由此可以得出结论:青鱼干扰素有助于BHK细胞抵抗MHV68的感染。

目录

摘要

第一章 前言

1．1 鼠γ疱疹病毒68(MHV68)：研究γ疱疹病毒感染的模型

1．1．1 KSHV病毒简介

1．1．2 MHV68简介

1．2 斑马鱼作为模式生物优势

1．2．1 有关斑马鱼胚胎发育的研究

1．2．2 斑马鱼在天然免疫中的研究

1．3 RLR信号通路中IKKa的相关研究

1．4 鱼类干扰素研究进展和青鱼干扰素

第二章 实验材料和方法

2．1 MHV68在斑马鱼中的研究

2．1．1 实验材料

2．1．2 主要仪器

2．1．3 试剂

2．1．4 实验方法

2．2 MHV68在MEF细胞中的研究

2．2．1 实验材料

2．2．2 主要仪器

2．2．3 试剂

2．2．4 实验方法

2．3 MHV68与青鱼l型干扰素a(bclFNa)的研究

2．3．1 实验材料

2．3．2 主要仪器

2．3．3 试剂

2．3．4 实验方法

第三章 实验结果

3．1 MHV68延迟了斑马鱼早期胚胎发育

3．2 MHV68的基因可以在被感染的斑马鱼胚胎中被检测到

3．3 MHV68引起斑马鱼胚胎和ZF4细胞中相关因子表达的变化

3．4 MHV68在MEF细胞的成斑大小

3．5 青鱼Ⅰ型干扰素a有助于BHK细胞抵御MHV68病毒

第四章 讨论

参考文献

硕士学期期间的论文发表情况

致谢

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