MnSOD基因沉默对H446肺癌干样细胞自我更新和迁移功能的影响

摘要

目的:
　　研究人小细胞肺癌NCI-H446细胞系细胞的生物学特性，探讨转染短发夹RNA(shRNA)表达载体沉默MnSOD基因是否通过影响uPAR表达水平，共同参与肺癌NCI-H446球形成细胞即肺癌干样细胞自我更新和迁移功能，为寻求和研究小细胞肺癌干细胞新型治疗靶标提供参考依据。
　　方法:
　　(1)采用无血清干细胞培养基超低黏附板悬浮培养法对人小细胞肺癌NCI-H446细胞系细胞进行初次成球培养，获得原代球细胞，随后进行连续球细胞传代培养，检测NCI-H446细胞系球细胞不同传代培养次数球形成率，选择球形成潜能最高的球细胞作为小细胞肺癌干样细胞模型，用于随后的实验研究;
　　(2)Western印迹检测NCI-H446细胞系亲本细胞和球形成细胞MnSOD蛋白表达;
　　(3)创口愈合试验和软琼脂集落形成试验分别检测NCI-H446细胞系亲本细胞和球形成细胞体外迁移和集落形成能力;
　　(4)采用腺病毒表达技术沉默NCI-H446球形成细胞MnSOD基因，并设置绿色荧光蛋白基因对照组和未处理组，Western印迹检测MnSOD基因沉默效率;
　　(5)球形成率测定、创口愈合试验和软琼脂集落形成试验分别检测NCI-H446细胞系球形成细胞MnSOD基因沉默后自我更新能力、迁移功能和集落形成能力。
　　(6)Western印迹检测NCI-H446细胞系球形成细胞MnSOD基因沉默后uPAR表达水平。
　　结果:
　　(1)球形成率测定结果显示，NCI-H446第2代球细胞在第3次成球培养时球形成率最高;
　　(2)Western印迹分析结果显示，与亲本细胞相比，第2代人小细胞肺癌NCI-H446细胞系球形成细胞（肺癌干样细胞）MnSOD蛋白高表达;
　　(3)创口愈合试验以及软琼脂集落形成试验结果显示，NCI-H446细胞系干样细胞创口愈合率和软琼脂集落形成率高于亲本细胞;
　　(4)人小细胞肺癌NCI-H446干样细胞uPAR蛋白表达高于NCI-H446亲本细胞;
　　(5)MnSOD shRNA转染NCI-H446干样细胞，MnSOD蛋白表达明显下调;
　　(6)MnSOD基因沉默能够有效抑制肺癌NCI-H446干样细胞体外球形成率、细胞迁移率以及软琼脂集落形成率;
　　(7) MnSOD基因沉默后uPAR表达下调。
　　结论:
　　(1)MnSOD蛋白高表达与NCI-H446肺癌干样细胞体外致瘤能力增强相关;
　　(2)MnSOD基因沉默抑制肺癌NCI-H446干样细胞体外自我更新和迁移能力，并下调uPAR表达。

目录

摘要

1 前言

1．1 研究背景

1．2 研究目的和意义

2．1 实验材料

2．2 实验方法

2．3 统计学分析

3 结果

3．2 NCI-H446亲本细胞与肺癌干样细胞MnSOD蛋白表达检测

3．3 NCI-H446亲本细胞与肺癌干样细胞迁移能力测定

3．4 NCI-H446细胞系肺癌干样细胞琼脂培养集落形成能力测定

3．5 NCI-H446细胞系肺癌干样细胞uPAR蛋白表达检测

3．6 NCI-H446MnSOD基因沉默效率检测

3．7 表达MnSOD shRNA腺病毒感染NCI-H446细胞系肺癌干样细胞自我更新能力测定

3．8 表达MnSOD shRNA腺病毒感染对NCI-H446细胞系肺癌干样细胞迁移能力的影响

3．9 表达MnSOD shRNA腺病毒感染NCI-H446细胞系肺癌干样细胞软琼脂集落形成率测定

3．10表达MnSOD shRNA小细胞肺癌NCI-H446细胞系肺癌干样细胞uPAR蛋白表达测定

4 讨论

5 结论

参考文献

综述 肿瘤干细胞在小细胞肺癌的研究进展

英文缩略词索引

攻读硕士学位期间的研究成果

致谢

声明