Caveolae和Caveolin-1对肺泡巨噬细胞上IL-1β/IFN-γ/MIP-2的影响

摘要

目的:
　　研究小窝(caveolae)正常结构的维持及小窝蛋白-1（caveolin-1，cav-1）的表达对肺泡巨噬细胞分泌促炎因子IL-1β、IFN-γ及趋化因子MIP-2的影响，并探讨CSD肽（caveolin-1 scaffolding domain peptide）对肺泡巨噬细胞IL-1β表达的调节。
　　方法:
　　支气管肺泡灌洗分离提取Balb/c小鼠原代肺泡巨噬细胞(alveolarmacrophages，AM)，免疫荧光法和Western blot鉴定AM上cav-1的表达。FilipinⅢ(2.5μg/ml)处理RAW264.7细胞30min，ELISA测定培养液细胞因子IL-1β、IFN-γ及MIP-2的浓度。FilipinⅢ处理RAW264.7细胞30min后，再加LPS刺激6h，荧光实时定量PCR(Real-Time PCR)测定IL-1β mRNA的量，ELISA测定培养液细胞因子IL-1β、IFN-γ及MIP-2的浓度。LPS(1μg/ml)处理AM及RAW264.7细胞6h，Western blot分析caveolin-1的表达。再用LPS处理RAW264.7细胞不同时间(0.25h、0.5h、1h、2h、4h、6h)，Western blot分析IL-1β的表达。不同浓度(5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L) CSD肽预处理AM6h后，用LPS处理4h; LPS处理RAW264.7细胞6h后，加CSD肽(5μmol/L)处理30h，Westernblot检测IL-1β的表达。
　　结果:
　　1.Balb/c小鼠AM上有cav-1的表达。
　　2.FilipinⅢ处理后RAW264.7细胞培养液细胞因子IL-1β、IFN-γ及MIP-2的浓度都升高。
　　3.LPS处理6h后，AM及RAW264.7细胞caveolin-1水平降低;且RAW264.7细胞IL-1β mRNA表达增高，释放在培养液里的IL-1β、IFN-γ及MIP-2的蛋白水平浓度也升高;FilipinⅢ联合LPS处理会加强这些因子的表达。在LPS处理的时效实验中，IL-1β在15min和2h升高最明显。
　　4.CSD肽预处理时，以浓度依赖方式抑制LPS刺激RAW264.7细胞生成IL-1β;CSD后处理时促进LPS刺激AM细胞生成IL-1β。
　　结论:
　　1.Caveolae和cav-1都参与调控炎症的发展。
　　2.FilipinⅢ破坏巨噬细胞上caveolae的结构及LPS诱导的cav-1表达下调都会促进IL-1β、IFN-γ和MIP-2的分泌。
　　3.CSD肽预处理能够下调LPS刺激产生的IL-1β。

目录

摘要

引言

第一章 cav-1在Balb／c小鼠AM上的表达

1 前言

2．1 实验材料

2．2 实验方法

3 结果

3．1 Balb／c小鼠AM上cav-1表达的鉴定

4 讨论

5 结论

第二章 FilipinⅢ对RAW264．7细胞炎症因子的影响

1 前言

2．1 实验材料

2．2 实验方法

3 结果

3．3 FilipinⅢ对RAW264．7细胞MIP-2的影响

4 讨论

5 结论

第三章 LPS对巨噬细胞cav-1及炎症因子的影响

1 前言

2．1 实验材料

2．2 实验方法

3．1 LPS对cav-1表达的影响

3．2 FilipinⅢ联合LPS处理对RAW264．7细胞的炎症因子分泌谱的影响

3．3 LPS对RAW264．7细胞IL-1β影响的时效关系

4 讨论

5 结论

第四章 CSD肽对LPS诱导的IL-1β分泌的影响

2．1 实验材料

2．2 实验方法

3 结果

3．2 CSD肽处理对LPS刺激下AM产生的IL-1β

4 讨论

5 结论

总结论

参考文献

附录

综述 CSD肽作用研究进展

攻读硕士学位期间主要研究成果

致谢

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