下调PKM2通过AKT/mTOR/SREBP1c通路调控FASN抑制膀胱癌细胞的生长

摘要

目的:脂肪酸合成酶(FASN)催化脂肪酸从头生物合成中的末端步骤，膀胱癌患者的低生存率和高疾病复发相关。丙酮酸激酶M2(PKM2)调节糖酵解水平的最后一步并为肿瘤提供生长优势。然而，PKM2的变化是否对FASN产生影响及其机制研究还不清楚，本论文将揭示在膀胱癌中下调PKM2抑制FASN表达的分子机制;为治疗膀胱癌提供新的靶点和科学依据。 方法:采用免疫印迹和免疫染色检测膀胱癌患者(n=20)和邻近正常膀胱组织(n=10)FASN的蛋白表达。蛋白免疫印迹(WB)，qRT-PCR和免疫荧光(IF)检测膀胱癌组织中PKM2的表达变化。用siPKM2转染细胞或PKM2抑制剂紫草素抑制PKM2的表达;用慢病毒shFASN转染细胞或用FASN的特异性抑制剂TVB-3166抑制FASN的表达。免疫共沉淀实验(COIP)则用来验证FASN与PKM2之间是否存在作用。WB检测p-Akt，p-mTOR和SREBP-1c水平探讨其分子机制。 结果:WB检测出FASN和PKM2在恶性肿瘤组的高表达与良性组比较。紫草素-PKM2抑制剂:随着浓度的加大，其抑制膀胱癌细胞生长与克隆形成的能力越强。一方面:紫草素(SK)处理或siPKM2抑制PKM2导致FASN表达下调，另一方面:当PKM2表达受到抑制而降低时，Akt/mTOR信号传导受阻而失活，使固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP1c)的表达下调，所述Akt/mTOR信号传导途径继而直接抑制转录的主要脂肪生成基因FASN来减少肿瘤生长。此外，这种抑制剂组合在膀胱癌细胞系中诱导了强烈的抗增殖和抗集落形成效应和细胞凋亡。 结论:我们的新发现PKM2是FASN的关键调节因子，通过结合转录因子SREBP-1c来调节FASN的表达。同时下调PKM2抑制SREBP-1c的表达是通过使AKT/mTOR通路失活来调控，进一步抑制FASN的表达，从而使膀胱癌细胞的生长增殖受到抑制。这些结果将为研究FASN在膀胱癌的发生发展以及成为治疗靶点奠定基础。

目录

摘要

1引言

2．1实验材料

2．2实验方法

2．3统计学分析

3结果

3．1 FASN在膀胱肿瘤组织和肿瘤细胞中高度表达

3．2 FASN在膀胱癌细胞的生长增殖中发挥重要作用

3．3下调PKM2抑制膀胱癌细胞的生长增殖

3．4 PKM2与FASN在膀胱癌细胞中的关系

3．5 PKM2通过结合SREBP-1c，调控FASN的表达

3．6下调PKM2抑制FASN的表达通过抑制Akt／mTOR／SREBP-1c信号通路

3．7紫草素和TVB-3166协同抑制膀胱癌细胞生长

4讨论

5结论

参考文献

附录

攻读硕士学位期间发表的论文

致谢

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