蹄叶橐吾叶多糖的提取及其体外生物学活性研究

摘要

近几年，我国空气雾霾情况逐年加剧，人们日渐重视对咽喉、肺部的保健，提高了对加强自身免疫力的意识。蹄叶橐吾的根及根茎在吉林省药材标准中记载为山紫莞，主“温肺下气，消痰止嗽”，它的叶片具有特殊风味，是延吉人民喜食的一种野菜，有研究表明蹄叶橐吾叶片提取物具有消炎和提高免疫力等功效，目前主要集中为有机溶剂提取物，本文以水提物为研究对象，提取、精制并分级蹄叶橐吾叶多糖（PLF），最后从抗氧化能力及对细胞存活率的影响两方面初步探讨其生物学活性。主要研究了以下几方面内容。
　　研究了PLF的提取及精制工艺。首先，对叶片定性检出酚类、多糖类、黄酮类、生物碱等活性成分；水提醇沉提取PLF，采用响应面试验优化PLF最佳提取工艺为料液比1:20（g/mL）条件下，在90℃水浴锅中提取2h，收集滤液3次，PLF提取率为8.76％；壳聚糖絮凝纯化PLF得到精制蹄叶橐吾叶多糖（DPLF），采用正交试验优化最优精制工艺为在50mL PLF（浓度为2mg/mL）中加入壳聚糖（浓度为2%）1mL，30℃条件下搅拌，絮凝60min后蛋白质去除率为85.03%，脱色率为81.74%，多糖损失率为42.81%；通过定性实验、紫外全波长扫描（UV-Vis）、红外光谱扫描（FTIR）和高效液相色谱（HPLC）等技术确定DPLF的理化性质，初步判断其除杂程度，特征基团及单糖组成成分。
　　采用离子交换层析柱梯度洗脱DPLF，结合琼脂糖凝胶柱层析进一步分级，最终得到DPLFN，DPLFA1-1，DPLFA1-2，DPLFA2-1，DPLFA3-1，DPLFA3-2，DPLFA4-1和DPLFA5-1八个组分。通过UV-Vis、FTIR、HPLC和高效凝胶渗透色谱（HPGPC）确定了其中五种组分几乎不含干扰类杂质；推测出可能含有的特征基团；明确了单糖组成成分，其中主要包含的单糖种类有：甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、岩藻糖和阿拉伯糖等；计算出该四种组分相对分子量（Mw）依次为4.0992×105，1.3016×106，3.4410×104和1.0280×104。
　　研究了DPLF的生物学活性。（1）DPLF的抗氧化活性：从总抗氧化能力、还原力和对DPPH自由基、超氧阴离子自由基、羟基自由基的清除能力五方面综合评价，结果表明DPLF具有一定的抗氧化能力，尤其对DPPH自由基清除能力较强，半抑制浓度为0.0351mg/mL；（2）采用MTT比色法测定DPLF对ConA诱导的小鼠脾细胞存活率的影响：当浓度为2μg/L时，影响显著，细胞存活率为100.3135%，此时ConA刺激细胞增殖指数为1.7606。

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第一章 绪 论

1.1 蹄叶橐吾简介

1.2 植物多糖基本概况

1.3 植物多糖的精制方法

1.4 植物多糖应用

1.5 本文选题的背景及意义

第二章 蹄叶橐吾叶多糖的提取与精制

2.1 实验材料与设备

2.2 原料的系统鉴定

2.3水提醇沉法提取蹄叶橐吾叶多糖

2.4 壳聚糖法精制蹄叶橐吾叶多糖（PLF）

2.5 标准曲线（葡萄糖和蛋白质）的绘制与成分测定

2.6 精制蹄叶橐吾叶多糖（DPLF）理化性质研究

2.7 精制蹄叶橐吾叶多糖（DPLF）结构初步研究

2.8 结果与讨论

2.9 本章小结

第三章 蹄叶橐吾叶多糖的分离纯化

3.1 材料与设备

3.2 离子交换柱层析分级精制蹄叶橐吾叶多糖（DPLF）

3.3 琼脂糖凝胶柱层析分级精制蹄叶橐吾叶多糖（DPLF）

3.4 标准曲线的绘制（葡萄糖）及成分含量测定

3.5 精制蹄叶橐吾叶多糖（DPLF）分级组分结构初步研究

3.6 结果与讨论

3.7 本章小结

第四章 精制蹄叶橐吾叶多糖的生物活性研究

4.1 实验材料与设备

4.2 精制蹄叶橐吾叶多糖（DPLF）抗氧化活性研究

4.3 精制蹄叶橐吾叶多糖（DPLF）对细胞存活率的影响

4.4 结果与讨论

4.5 本章小结

第五章 结 论

致谢

参考文献

作者简介

攻读硕士学位期间科研成果