油茶优良无性系组织培养、RAPD分子鉴别和cDNA文库构建的研究

摘要

该文主要就油茶优良无性系的组织培养、RAPD鉴别和cDNA文库构建三方面的内容进行研究,为今后油茶品种改良、重要基因分离克隆及提高单位面积产量奠定基础.以油茶优良无性系湘林4号腋芽和子叶为外植体,分别采用附加不同种类激素的MS培养基对其进行组织培养实验.选择12个湘林系列的油茶优良无性系和1个普通油茶对照为实验构料,采用改良的CTAB法提取基因组DNA.对影响RAPD反应的主要因素(诸如 Mg<'2+>等)进行了优化,获得了一个重复性高、稳定性好的RAPD反应体系.然后以该体系对上述材料进行RAPD检测和鉴别.以湘林4号优良无性系组培的嫩芽和胚性愈伤组织为材料,利用改良CTAB法提取总RNA后经Oligo(dT)纤维素柱分离纯化得到mRNA,再加入Not Ⅰ引物接头,在SuperScript ⅡRT反转录酶和其他酶的作用下合成一链cDNA和二链cDNA,经Sal Ⅰ接头修饰、限制性核酸内切酶NotⅠ消化,再经柱层析纯化后同质粒载体PCMV·SPORT6连接,并转化感受态林肠杆菌DH10B菌株,从而构建了第一个油茶cDNA文库.经抽样检测,所构建的cDNA文库包含1.36×10<'6>个基因克隆,重组子的百分比为99.78﹪,克隆片段长度大于:560bp,说明构建的文库质量较高,能够满足ESTs文库构建、从文库中分离筛选重要基因等研究工作的需要,为今后进一步研究奠定了很好的物质和技术基础.

目录

缩略词

第一部分文献综述

1油茶组织培养研究进展

2分子标记技术及其在植物遗传育种研究中的应用

2.1分子标记概念的界定

2.2常见DNA分子标记的种类

2.3分子标记技术及其在植物遗传育种研究中的应用

3 cDNA文库构建研究进展

3.1 cDNA文库定义

3.2 cDNA文库构建的方法

3.3 cDNA文库的主要应用

4本项研究的立项依据、目的和意义

第二部分论文正文

1油茶优良无性系组织培养

1.1实验材料

1.2实验方法

1.3结果与分析

1.4 讨论

2油茶优良无性系RAPD分子鉴别

2.1实验材料

2.2实验方法

2.3实验结果与分析

2.4讨论

3.油茶优良无性系cDNA文库构建

3.1实验材料

3.2实验方法

3.3实验结果与分析

3.4讨论

4本研究的创新点

主要参考文献

ABSTRACT

附录

致谢