声明
摘要
缩略词表
第一章引言
1．1研究基因转录的意义
1．2基因转录研究现状
1．2．2 R从聚合酶Ⅱ指导的基因转录的研究进展
1．2．3本课题的目的和意义
第二章非放射性体外转录实验方法的建立及其应用
2．1前言
2．2实验材料和方法
2．2．1试剂及其配制
2．2．2质粒和基因克隆
2．2．3无细胞系统的体外转录
2．2．4细胞培养和荧光素酶活性检测实验
2．3实验结果
2．3．1 DNA模板清除
2．3．2新方法的建立
2．3．3体外转录新方法的验证及应用
2．4讨论与结论
第三章转录因子ⅡA识别元件在RNA聚合酶Ⅱ指导的基因转录中的调节作用
3．1前言
3．2实验材料与方法
3．2．1实验材料
3．2．2实验方法
3．3实验结果
3．3．1在AdML启动子中TFIIA与TATA box上游的DNA序列直接结合
3．3．2 TATA box上游的TFIIA识别元件的获得和它在天然启动子中的普遍性
3．3．3依赖TATA box启动子的IIARE突变抑制TFIIA招募和启动子活性
3．3．4IIARE在无TATA box的AdmL-IIARE启动子中是一个负性调控元件
3．3．5 IIARE通过增加Pol Ⅱ、TFIIA、TAF4和p300在AdML-IIARE启动子上招募对转录起到正调控作用
3．4讨论与结论
第四章TFIIA与其识别元件互作调节RNA聚合酶Ⅱ基因转录
4．1前言
4．2实验材料和方法
4．2．1试剂配制
4．2．2基因克隆
4．2．3蛋白质原核表达
4．2．4 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和考马斯亮蓝染色
4．2．5 HEK293T稳定细胞系的建立
4．2．6利用qPCR检测HEK293T TFIIA α/βWT及其突变体稳定表达细胞系内源基因的表达量
4．3实验结果
4．3．1 TFIIA α/β突变减少TFIIA在启动子AdML上的结合
4．3．2 TFIIA α/β突变抑制AdML启动子的体外转录活性
4．3．3 TFIIA α/β突变抑制细胞内AdML-IIARE启动子的转录活性
4．3．4 TFIIA α/β突变抑制天然含IIARE启动子的转录活性
4．3．5 TFIIA α/β突变通过减少TFIIA、TBP、p300和Pol Ⅱ在IIARE上的招募抑制转录活性
4．4讨论与结论
第五章总结与展望
5．1总结
5．2展望
致谢
参考文献
附录
