高表达精胺/精脒N1-乙酰转移酶对A549肺癌细胞的增殖和药物敏感性的作用

摘要

目的:多胺为肿瘤细胞快速增殖所必须,而精胺/精脒-N1-乙酰基转移酶(spermine/spermidine N1-acetyltransferase,SSAT)是多胺分解代谢途径中的第一个限速酶。为探讨 SSAT作为抗肺癌分子靶点的潜在应用价值,本实验中我们首先构建高表达 hSSAT的A549细胞株,然后研究 hSSAT高表达对人肺癌 A549细胞的生长增殖、和对抗肿瘤药物米托蒽醌敏感性的影响。
　　方法:(1)以 pCR2.1/hSSAT质粒为模板,HindⅢ/XhoⅠ双酶切法获得人 SSAT基因编码区,将其克隆入真核表达载体 pcDNA3.1(+),构建真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)/hSSAT。用pcDNA3.1(+)/hSSAT质粒转染 A549细胞,筛选获得稳定高表达 hSSAT的细胞株。(2) MTT法检测高表达 hSSAT对肺癌 A549细胞生长增殖的影响;流式细胞术检测高表达 hSSAT对 A549细胞周期的影响;划痕法检测高表达hSSAT对 A549细胞迁移的影响。(3) MTT法、DNA片段化分析、流式细胞术、线粒体膜电位分析检测高表达 hSSAT的A549细胞对抗癌药物米托蒽醌敏感性的影响。
　　结果:(1)成功构建真核表达质粒 pcDNA3.1(+)/hSSAT,并成功获得高表达 hSSAT的A549肺癌细胞株;(2)稳定高表达 SSAT细胞株的增殖活性在所有测定时间点上(24h、48h、72h)均显著性降低;与对照细胞相比,高表达 SSAT的细胞株 S期细胞减少,而细胞凋亡率显著增加;划痕法检测发现,A549/pcDNA3.1(+)对照细胞株在24h后划痕基本消失,而A549/hSSAT细胞株直到48h仍未愈合。(3)以0μmol/L-1、0.04μmol/L-1、0.08μmol/L-1、0.16μmol/L-1、0.32μmol/L-1和0.64μmol?L-1共6个浓度的米托蒽醌处理对照细胞和A549/hSSAT细胞,MTT法检测细胞生长情况。结果显示,米托蒽醌对人肺癌细胞株 A549有增殖抑制作用,但 A549/hSSAT对米托蒽醌更加敏感;流式细胞术检测发现,经0.04μmol?L-1的米托蒽醌处理24h后,A549细胞发生凋亡,高表达 hSSAT的细胞株凋亡率更高;DNA片段化检测结果和上述类似,经0.04μmol/L-1的米托蒽醌处理24h后 A549/hSSAT细胞株 DNA片段化现象更为明显;米托蒽醌能显著降低 A549细胞的线粒体膜电位,而SSAT高表达的A549细胞相对于对照细胞降低更加显著。
　　结论:稳定高表达 hSSAT可在 A549肺癌细胞中部分模拟多胺类似物类抗癌药物的药理活性,导致瘤细胞生长抑制和细胞凋亡,并且增加了细胞对经典抗癌药米托蒽醌的敏感性。上述研究提示 SSAT有作为肺癌治疗分子靶点的潜在应用价值。

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英文缩略词表

引 言

1 材料与方法

1.1 仪器和设备

1.2 实验方法

2 结果

第一部分 稳定高表达 hSSAT 的 A549 细胞株的构建与筛选

第二部分: 稳定高表达 SSAT 对 A549 细胞增殖及迁移的影响

第三部分: A549 细胞稳定高表达 SSAT 对米托蒽醌敏感性的影响

3 讨论

4 小结

参考文献

综 述

后 记

附录：攻读硕士学位期间发表的部分学术论著