PPARγ在大鼠胶原诱导性关节炎滑膜中的表达及意义

摘要

目的:观察大鼠胶原诱导性关节炎模型(CIA)滑膜组织中过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)的表达情况,以及PPARγ激动剂罗格列酮对 NF-κB、TNF-α、IL-1β表达的影响,探讨类风湿关节炎临床治疗的新靶点。
　　方法:(1)健康雄性 Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为2组:正常对照组、造模组,造模组中又分为模型组、给药7天组、对照7天组、给药14天组、对照14天组。光镜观察滑膜组织形态;免疫组织化学法检测滑膜组织中PPARγ和NF-κB的蛋白表达情况;半定量反转录 PCR检测大鼠滑膜 PPARγmRNA表达水平;ELISA法测定大鼠外周血中TNF-α和IL-1β的含量。(2)所有数据采用SPSS13.0统计学软件分析。
　　结果:(1)大鼠胶原诱导性关节炎模型的评估:于造模后第21天进行关节炎指数评分,造模组与正常组关节炎评分比较,P<0.05,两组有显著差异;(2)病理形态学检查显示:正常对照组中,滑膜由1～2层滑膜细胞组成,无增生,细胞排列整齐,滑膜组织中无炎性细胞浸润;造模组中,滑膜细胞水肿,有3～5层增生,细胞排列不整齐,滑膜组织中有大量的炎性细胞浸润;(3)免疫组织化学结果显示:PPARγ表达的细胞定位为细胞浆,棕黄色颗粒为阳性,正常组滑膜组织染色为阴性;模型组、对照7天组、对照14天组滑膜组织染色为弱阳性～中等阳性;给药7天组、给药14天组滑膜组织染色为中等阳性～强阳性。给药14天组表达程度最高,阳性率83.33％,多为++～+++;给药7天组阳性率66.67％,多为+～++;模型组、对照7天组、对照14天组阴性和弱阳性表达居多。NF-κB表达的细胞定位为细胞浆,棕黄色颗粒为阳性,正常组滑膜组织染色为阴性;模型组、对照7天组、对照14天组滑膜组织染色为中等阳性～强阳性;给药7天组、给药14天组滑膜组织染色为阴性～中等阳性。模型组表达程度最高,阳性率75.00％,多为++～+++;给药7天组阳性率33.33％,多为+～++;(4)反转录 PCR检测结果显示:造模后 PPARγmRNA的表达增加;造模组中,给药7天与14天相比,随着给药时间延长,PPARγmRNA的表达也随之增加;与正常组比较,模型组 P<0.05;与给药7天组比较,对照7天组 P<0.05;与给药14天组比较,对照14天组 P<0.05;与模型组比较,给药各组 P<0.05,有统计学意义;(5) ELISA法检测结果显示:给药组与造模组相比,大鼠外周血 TNF-α和IL-1β的水平明显降低,即:与正常组比较,模型组 P<0.05;与给药7天组比较,对照7天组 P<0.05;与给药14天组比较,对照14天组 P<0.05;与模型组比较,给药各组 P<0.05,有统计学意义。
　　结论:大鼠胶原诱导性关节炎模型是类风湿关节炎基础研究较为理想的动物模型。造模成功后,大鼠滑膜组织 PPARγ的表达上调,给予 PPARγ激动剂罗格列酮后, PPARγ蛋白的表达水平与 PPARγmRNA的表达均增强,NF-κB蛋白的表达减弱, TNF-α和IL-1β的含量降低。即:本实验使用PPARγ激动剂罗格列酮后,可激活 PPARγ的表达,抑制NF-κB的表达和炎症因子 TNF-α和IL-1β的分泌。

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引 言

材料与方法

1.1 材料

2.1 实验方法

3.1 观察指标

4.1 统计学方法

结果

1 一般情况观察

2 关节炎指数评分

3 组织病理学检查

4 免疫组织化学结果

5 各组滑膜组织中 PPARγ的 mRNA 表达

6 各组实验大鼠血清细胞因子含量见表 5

讨论

小结

参考文献

综 述

后 记

附录：攻读硕士学位期间发表的部分学术论著