鄂西竹节参野生品和栽培品及不同年限栽培品的品质分析

摘要

目的:研究鄂产竹节参的品质,对鄂西竹节参野生品和栽培品进行样品采集以及栽培情况调查,通过HPLC指纹图谱研究,对竹节参野生品和栽培品以及不同年限栽培品化学成分组成进行分析,主要化学成分含量进行比较,明确竹节参野生品和栽培品的化学差异,以及不同年限栽培品化学成分的异同和栽培年限对竹节参主要化学成分的积累规律;并通过体外抗氧化实验,初步检测竹节参的生物学活性,初步筛选有活性的竹节参单体,作为其品质分析和质量控制的指标。
　　方法:(1)在鄂西主产区恩施州宣恩县椿木营乡、雪落寨、药材仓、以及恩施州鹤峰县北佳乡、奇峰观镇采集不同年限竹节参野生品和栽培品,同时对鄂西竹节参栽培情况进行调研。(2)运用溶剂萃取及大孔吸附树脂色谱,硅胶色谱及制备高效液相细分离等手段,对鄂产竹节参的主要化学成分进行分离、纯化,并结合1H-NMR,13C-NMR,MS等对其结构进行鉴定。(3)竹节参野生品及栽培品、不同年限竹节参栽培品HPLC化学指纹图谱的研究,采用流动相为乙腈-0.1％磷酸水溶液梯度洗脱,,以获得的色谱峰的保留时间和峰面积数据,作相似度分析。同时对其主要成分进行含量分析。(4)对竹节参各主要成分以及不同年限竹节参进行抗超氧阴离子活力、抗羟自由基活力检测的体外抗氧化实验。
　　结果:(1)资源调查中共采集到了竹节参野生品6批共35株以及竹节参栽培品6批药材;调查中尚发现,鄂西各竹节参产区竹节参野生资源都比较稀少,目前在恩施州宣恩县椿木营乡有大面积人工栽培;而作为商品的竹节参药材,主要以栽种5年的竹节参为主,少量混有竹节参的其他近似品种及野生品或移栽野生品。(2)从鄂产竹节参中分离鉴定得到5个单体化合物,分别为人参皂苷Re、竹节参皂苷Ⅴ、竹节参皂苷Ⅳ、竹节参皂苷Ⅳa,以及PJS-2。(3)通过对鄂西竹节参主要成分进行体外抗氧化实验,明确了竹节参各主要成分抑制超氧阴离子能力顺序为:竹节参皂苷Ⅳ﹥竹节参皂苷Ⅳa﹥竹节参皂苷Ⅴ﹥Pjs-2;抑制羟自由基大小能力的顺序为:竹节参皂苷Ⅳ﹥Pjs-2﹥竹节参皂苷Ⅳa﹥竹节参皂苷Ⅴ;其他三个主要成分抗超氧阴离子和抗羟自由基的能力与竹节参皂苷Ⅳ相比有明显差异。(4)建立了鄂西竹节参野生品及栽培品、不同生长年限竹节参栽培品的高效液相指纹图谱,并对主要成分竹节参皂苷Ⅴ、竹节参皂苷Ⅳ、竹节参皂苷Ⅳa,以及PJS-2进行了含量比较;初步明确了鄂西竹节参野生品和栽培品、不同生长年限栽培品的化学组分差异,以及主要成分竹节参皂苷Ⅴ、竹节参皂苷Ⅳ、竹节参皂苷Ⅳa,以及PJS-2的含量差异;鄂西竹节参野生品和栽培品的指纹图谱相似度较高,化学组分无明显差异,主要成分的含量差异较小;不同生长年限竹节参栽培品的化学成分亦无明显差异,主要成分(竹节参皂苷Ⅴ、竹节参皂苷Ⅳ、竹节参皂苷Ⅳa)的差异比较明显。(5)对不同年限竹节参栽培品进行体外抗氧化实验,明确了不同年限竹节参栽培品的抑制超氧阴离子能力顺序为:两年﹥三年﹥一年﹥六年﹥五年﹥四年;抑制羟自由基能力的大小顺序为:两年﹥三年﹥一年﹥六年﹥五年﹥四年
　　结论:鄂西竹节参野生资源已经严重枯竭,人工种植面积相对其它中药材也较少,目前市场竹节参药材供应主要以竹节参栽培品为主,应加大力加强人工种植,以及加强竹节参栽培品的质量控制研究。竹节参主要化学成分竹节参皂苷Ⅳ与其他三个竹节参的主要化学成分的体外抗氧化能力相比有显著差异,竹节参皂苷Ⅳ的能力最强,建议将其作为竹节参质量评价的一个指标成分;鄂西竹节参野生品和栽培品的化学成分无明显差异,主要成分的含量也无明显差异,且竹节参抗氧化活性指标成分竹节参皂苷Ⅳ的含量无明显差异,因此确定鄂西竹节参栽培品可以做为竹节参野生品的替代品。不同生长年限竹节参栽培品化学成分无明显差异,主要成分含量随年限变化呈动态变化;不同生长年限竹节参栽培品的体外抗氧化能力存在明显差异,考虑其经济和社会效益价值,在此建议6年生为最佳栽培年限。

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英文缩略词表

引 言

材料与方法

1.1 仪器和设备

1.2 实验方法

结果

第一部分 鄂西竹节参野生品和栽培品样品采集及栽培情况调查

1.1 竹节参药材种植基地（恩施）的调研及样品采集

1.2 鄂西其他地区竹节参样品采集及栽培情况调查

第二部分 恩施产竹节参化学成分的分离鉴定

2.1 化学成分分离

2.2 结构鉴定

第三部分 竹节参质控指标成分的筛选

3.1 竹节参各主要成分清除超氧阴离子能力测试

3.2 竹节参各主要成分清除羟自由基能力测试

第四部分 竹节参野生品和栽培品的品质分析

4.1 竹节参野生品和栽培品的化学成分 HPLC-UV 指纹图谱研究

第五部分 不同生长年限竹节参栽培品的品质分析

5.1 不同生长年限竹节参栽培品的化学成分 HPLC-UV 指纹图谱研究

5.2 不同生长年限竹节参栽培品主要成分含量比较

5.3 不同生长年限竹节栽培品体外抗氧化实验

讨论

1.1 鄂西竹节参野生品和栽培品的植物资源调查及样品采集

1.2 竹节参质控指标成分筛选

1.3 竹节参野生品和栽培品的品质分析

1.4 不同年限竹节参栽培品的品质分析

小结

参考文献

综 述

后 记

附录：攻读硕士学位期间发表的部分学术论著