TRPV4通道在正常及高血压大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用及其可能机制研究

摘要

目的：探讨TRPV4通道是否参与正常及高血压大鼠的心肌缺血再灌注损伤，并对其可能机制进行初步研究。
　　方法：(1)选取健康Sprague-Dawley(SD)大鼠并运用“两肾一夹”方法制备高血压大鼠模型。健康(normal, n)SD大鼠/高血压(hypertensive, h)大鼠均分别随机分为缺血/再灌注(nI/R/hI/R)组、TRPV4抑制剂(nRN1734/hRN1734)组和 TRPV4激动剂(nRN1734/hRN1747)组(每组n=6)。(2)采用langendorff离体心脏灌流装置对上述各组大鼠离体心脏进行灌流。nI/R/hI/R组在平衡灌流20 min后，全心缺血30 min，复灌120min；nRN1734/hRN1734组在复灌前5 min给予特异性TRPV4抑制剂RN1734(10μM)，其余处理同 nI/R/hI/R组；nRN1734/hRN1747组在复灌前5 min给予特异性TRPV4激动剂RN1747(10μM)，其余处理同nI/R/hI/R组。Powerlab生物信号处理系统记录各组血流动力学指标，收集并测量各组冠脉流出液(coronary flow，CF)每分钟流量，并检测灌流液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量，用TTC染色法分析心脏梗死面积；免疫组化及western blotting法检测TRPV4蛋白在各组大鼠心肌组织中的表达差异。检测TRPV4开放时心肌细胞内ROS及Ca2+含量的变化
　　结果：(1)成功制备了“两肾一夹”高血压大鼠模型。造模术后7天、14天，大鼠与造模前相比血压明显升高，且差异均有显著统计学意义(P<0.001)。(2)与单纯缺血/再灌注相比，TRPV4通道开放使正常大鼠及高血压大鼠缺血后再灌注期左室发展压(LVDP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室压最大上升/下降速率(±dp/dtmax)、心率(HR)及冠脉流量(CF)的恢复明显增强(P<0.05)，而心肌梗死面积和乳酸脱氢酶含量明显减小(P<0.01)。(3)免疫组化及Western blotting结果显示高血压大鼠心肌上TRPV4蛋白的表达高于正常大鼠(P<0.05)；与单纯缺血再灌注比，TRPV4激动剂RN1747可使正常和高血压大鼠心肌TRPV4表达增强(P<0.05)，而TRPV4抑制剂RN1734可使TRPV4表达减少(P<0.05)。(4)与对照组相比，TRPV4通道的开放引起心肌细胞内Ca2+浓度增加、ROS生成减少(P<0.05)。
　　结论：TRPV4通道开放对正常及高血压大鼠心肌缺血再灌注损伤有保护作用；其机制可能与其开放导致钙信号介导的心肌细胞内ROS生成减少有关。

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英文缩略词表

引言

第一部分 高血压大鼠模型的建立

材料与方法

1.1 材料

1.2 实验方法

结果

第二部分 TRPV4通道在正常及高血压大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

结果

1.1 血流动力学指标

2.1乳酸脱氢酶LDH检测

3.1 各组大鼠梗死面积改变

4.1 免疫组化检测各组大鼠心肌上TRPV4蛋白的表达差异

5.1 Western Blotting检测各组大鼠心肌上TRPV4蛋白的表达差异

第三部分 TRPV4通道参与心肌缺血再灌注损伤的机制研究

材料与方法

1.1 材料

1.2 方法

结果

1.1 心肌细胞Ca2+检测

2.1 心肌细胞ROS检测

讨论

结论

参考文献

综述:TRPV1和TRPV4通道参与缺血/氧处理心血管保护的研究进展

后记

附录：攻读硕士学位期间发表的部分学术论著