miRNA-155调控NSCLC细胞株MMPs表达及影响其侵袭转移能力的研究

摘要

目的：研究miR-155对非小细胞肺癌(NSCLC)细胞株基质金属蛋白酶(MMPs)的表达，以及对NSCLC细胞株形态、增殖、侵袭和转移能力的影响。
　　方法：
　　(1)将miR-155 mimic、NC、miR-155 inhibitor、inhibitor NC用Lipofectamine2000分别转染入A549、H1299、H460细胞株中。
　　(2) Real time PCR技术检测miR-155以及MMPs mRNA水平的变化。
　　(3) ELISA技术检测MMPs蛋白表达水平的变化。
　　(4)显微镜下观察 miR-155对细胞形态的影响；MTT分析 miR-155对细胞增殖的影响；Transwell、划痕实验分析miR-155对细胞侵袭转移能力的影响。
　　(5) A549细胞株接种建立裸鼠移植瘤模型。成瘤后，瘤内注射miR-155 mimic、inhibitor和对照，每5天转染一次，共转染5次。每3天测量肿瘤组织大小。最后一次转染后3天处死裸鼠，眼眶取血，分离血清；剥离肿瘤组织称重，匀浆，提取总RNA。
　　结果：
　　(1) miR-155的mimic和inhibitor可改变NSCLC细胞株中miR-155表达水平。
　　(2) miR-155过表达可促进NSCLC细胞株增殖，提高其侵袭转移能力。
　　(3) miR-155可增强A549细胞株中MMPs mRNA表达水平，其中，对MMP-2、MMP-7、MMP-9、MMP-10影响较大。
　　(4) miR-155过表达可提高A549、H1299、H460细胞株中MMP-2、MMP-7、MMP-9 mRNA和蛋白表达水平。
　　(5)裸鼠移植瘤实验中miR-155 mimic处理组瘤体较其阴性对照组大，证实miR-155对裸鼠移植瘤的生长有促进作用，可影响瘤体组织中MMP-2、MMP-7、MMP-9的表达水平，miR-155可提高MMP-2、MMP-7、MMP-9 mRNA表达水平及MMP-7蛋白表达水平。
　　结论：miR-155过表达增强 NSCLC细胞株的侵袭转移能力可能是通过增加MMP-2、MMP-7和MMP-9的表达实现的。

目录

声明

英文缩略词表

引言

材料与方法

1.1 材料

1.1.1仪器和设备

1.1.2 试剂

1.1.3 实验用细胞系

1.1.4 实验用裸鼠、相关饲养条件及耗材

1.1.5 溶液配置

1.2.1细胞培养

1.2.2 细胞转染（Lipofectamine(R) 2000 Transfection Reagent，以6孔板为例）

1.2.3 提取细胞总RNA（以6孔板细胞为例）

1.2.4 提取组织总RNA

1.2.5 测定RNA浓度及λ260/280

1.2.6 逆转录cDNA

1.2.7 RT-PCR与Real-time PCR

1.2.8 MTT比色法（以24孔为例）

1.2.9 划痕实验

1.2.10 Transwell迁移实验（以A549细胞为例）

1.2.11 Transwell侵袭实验（以A549细胞为例）

1.2.12 ELISA实验

1.2.13 动物实验

1.2.14 统计学分析

结果

第一部分 miR-155对NSCLC细胞株侵袭转移能力的影响

1.1 miR-155的mimic和inhibitor对NSCLC胞株中miR-155表达水平的影响

1.2 miR-155对NSCLC细胞株形态的影响

1.3 miR-155对NSCLC细胞株增殖的影响

1.4 miR-155对NSCLC细胞株侵袭迁移能力的影响

2.1 miR-155对A549细胞株中MMPs mRNA水平的影响

2.2 miR-155对NSCLC细胞株中MMP-2表达水平的影响

2.3 miR-155对NSCLC细胞株中MMP-7表达水平的影响

2.4 miR-155对NSCLC细胞株中MMP-9表达水平的影响

2.5 miR-155对NSCLC细胞株中MMP-10表达水平的影响

3.1 miR-155对瘤体生长的影响

3.2 miR-155对瘤体中MMPs mRNA水平的影响

3.3 miR-155对瘤体中MMPs蛋白水平的影响

讨论

结论

参考文献

综 述:（未发表） miRNAs在非小细胞肺癌肿瘤微环境中作用的研究进展

后记

附录：攻读硕士学位期间发表的部分学术论著