靶向10--羟基喜树碱脂质纳米药物载体的制备和性能研究

摘要

普通的药物存在着很多缺陷而不能达到理想的抗癌效果，例如:药物作用的半衰期短、靶向性低、系统毒性高等，因此，设计和构筑新型的药物传递系统，在克服以上缺点、提高药物抗癌效果方面具有非常重要的意义。10-羟基喜树碱（10-hydroxycamptothecin，HCPT）是一种广谱性的抗癌药物，但是其结构的不稳定性、易引起多药耐药性的产生、较高的系统毒性等因素明显地制约了它在临床上的应用，本研究的目的是开发一种新型的药物传递系统，提高HCPT的抗癌效率、逆转多药耐药性、促进HCPT在临床上的应用。 本研究以硬脂酸甘油酯作为药物载体的内核，HCPT作为模型药物包裹在其中，木葡聚糖作为载体的外壳，制备出了粒径小且均一的固体脂质纳米粒(solid lipid nanoparticles，SLN)。同时也测试了SLN/HCPT的体外抗肿瘤活性、在肿瘤细胞以及亚细胞的药动学性质、荷瘤小鼠体内的药动学性质、荷瘤小鼠体内的抗肿瘤活性。 SLN/HCPT表现出很好的缓控释性、对耐药性肝癌的生长表现出较强的抑制作用。SLN/HCPT能够促进药物在耐药性的HepG2/HCPT cells以及细胞核内聚集，延长了药物在小鼠血液的循环时间，有效地抑制了肿瘤的生长，表现出较强的抗癌活性，有效地逆转多药耐药性。 在以上的基础上，以大豆油作为药物载体的内核，HCPT作为模型药物包裹在其中，木葡聚糖作为载体的外壳，制备出了粒径小且均一的纳米结构脂质药物载体(nanostructured lipid carriers，NLC)。测试了NLC/HCPT在体外抗肿瘤活性、在肿瘤细胞的积累情况，验证了NLC/HCPT进入细胞的机制，探究了NLC/HCPT在荷瘤小鼠体内的药动学性质以及生物组织分布，测试了NLC/HCPT在荷瘤小鼠体内的抗肿瘤活性。 NLC/HCPT表现出很好的缓控释性、对耐药性肝癌的生长表现出较强的抑制作用。NLC/HCPT主要以内吞作用进入到耐药性的HepG2/HCPT cells里，并且促进了药物在HepG2/HCPT cells的聚集。NLC延长了HCPT在小鼠血液的循环时间，促进了HCPT在肿瘤的聚集，降低了对其他正常组织的毒副作用，有效地抑制了肿瘤的生长，表现出较强的抗癌活性，有效地克服了多药耐药性。 本研究设计出了新型纳米药物传递系统，在实现靶向性、降低系统毒性、逆转多药耐药性等方面提供了一些实验依据和借鉴。

目录

声明

摘要

第一章绪论

1．1 10-羟基喜树碱

1．2多药耐药性及产生机制

1．3靶向给药系统及分类

1．4脂质纳米载体的概况

1．5纳米生物技术的国内外研究状况

1．6本课题的立题思想和意义

1．7本课题所做的工作

2．1前言

2．2实验方法

2．2．1实验仪器及药品

2．2．2非离子型乳化剂(吐温-80、吐温-60、吐温-40、吐温-20)的选择

2．2．3阴离子型乳化剂十二烷基硫酸钠的选择

2．2．4阳离子乳化剂十六烷基三甲基澳化铵的选择

2．2．5正交实验设计筛选处方

2．2．6固体脂质纳米粒的制备

2．2．7验证实验

2．2．8固体脂质纳米粒的包封率测定

2．2．9固体脂质纳米粒的体外释放曲线

2．3实验结果

2．3．1吐温系列乳化剂的种类及用用量对实验结果的影响

2．3．2阴离子型乳化剂十二烷基硫酸钠的用量对对实验结果的影响

2．3．3阳离子型乳化剂十六烷基三甲基澳化铵的用量对对实验结果的影响

2．3．4最佳乳化剂种类和用量的确定

2．3．5正交实验

2．3．6验证实验

2．3．7脂质纳米粒的体外释放曲线

2．4讨论

2．5小结

第三章固体脂质纳米粒的抗肿瘤活性

3．1前言

3．2实验方法

3．2．1仪器及药品

3．2．2细胞和动物

3．2．3耐药性细胞培养

3．2．4固体脂质纳米粒体外抑制肿瘤细胞增殖

3．2．5细胞核和细胞质的分离方法的建立

3．2．6样品的处理

3．2．7细胞摄取动力学研究

3．2．8细胞消除动力学研究

3．2．9小鼠体内药动学

3．2．10荷瘤小鼠的准备

3．2．12统计学分析

3．3实验结果

3．3．1固体脂质纳米粒体外抑制肿瘤细胞增殖

3．3．2细胞摄取动力学实验

3．3．3细胞消除动力学实验

3．3．4小鼠体内药动学

3．3．5 BALB／c小鼠体内抗肿瘤活性

3．4讨论

3．5小结

第四章纳米结构脂质药物载体的制备及抗肿瘤活性

4．1前言

4．2实验方法

4．2．1实验仪器及药品

4．2．2细胞和动物

4．2．3纳米结构脂质药物载体的制备

4．2．4 10-羟基喜树碱微乳的制备

4．2．5纳米结构脂质药物载体的表征

4．2．6纳米结构脂质药物载体的体外释放

4．2．7纳米结构脂质药物载体体外抑制肿瘤细胞增殖

4．2．8纳米结构脂质药物载体细胞内摄取实验

4．2．9细胞摄取纳米结构脂质体的机制探究

4．3．1纳米结构脂质药物载体的表征

4．3．2纳米结构脂质药物载体的体外释放曲线

4．3．3纳米结构脂质药物载体体外抑制肿瘤细胞增殖

4．3．4纳米结构脂质药物载体细胞内摄取实验

4．3．5细胞摄取纳米结构脂质药物载体机制

4．3．6 10-羟基喜树碱在小鼠体内的组织分布

4．3．7纳米结构脂质药物载体小鼠体内抗肿瘤作用

4．4讨论

4．5小结

第五章全文总结与展望

参考文献

附录

致谢