南洞庭湖野生经济蚌类遗传聚类分析及RAPD特异标记的筛选

摘要

近年来，湖泊、河流等内陆水域污染程度加剧、蚌类栖息地的人为干预和资源的过度开发利用，这在一定程度上对淡水蚌类的种质资源造成破坏，一些经济蚌类的自然资源日益减少甚至濒临灭绝，尤其是育珠蚌种质资源退化严重，严重制约了淡水育珠产业的发展。因此，为了进一步了解不同种类的野生经济蚌的遗传多样性现状，从分子遗传学角度对洞庭湖区野生经济蚌类资源进行评估，本研究采用RAPD技术对南洞庭湖9属15种共61个野生经济蚌类的遗传聚类关系进行了分析，找出了种属间特异RAPD标记引物和特异标记条带，并对蚌的不同组织基因组DNA提取效果进行了比较。具体实验结果如下： 1.采用改良CTAB法提取蚌的性腺、斧足、外套膜、闭壳肌、鳃、肝脏六个主要组织器官的基因组DNA，发现性腺的提取效果最好，提取过程中研磨容易，水浴消化时间短，DNA电泳带型最清晰；斧足的提取效果次之，只是在提取过程中，斧足研磨难度比较大，水浴消化时间较长；提取效果最不理想的是外套膜，DNA带型不明亮，且有拖尾现象。总的来讲，采用改良CTAB法能够提取淡水蚌类不同组织的基因组DNA，且所提取的DNA能够满足实验ALFP和RAPD的实验要求。 2.经重复筛选，从60条RAPD随机引物中筛选出11条能够扩增出清晰、稳定且重复性好的RAPD指纹条带的有效引物，占被测引物的18.2﹪；整个RAPD-PCR共扩增出l775条清晰、稳定且重复性好的DNA指纹条带，平均每条引物扩增出43.5条带，扩增出带的片段分布在约50-1.5kb处，这些条带构成了南洞庭湖9属15种淡水双壳贝类的分子指纹图谱，充分揭示了种间和种内的遗传差异。 3.通过对扩增的结果进行分析，找到了种属间的RAPD特异标记引物¨条，RAPD特异标记带15条，分布在蚶形无齿蚌、鱼尾楔蚌、射线裂嵴蚌、尖锄蚌、扭蚌、巨首楔蚌、背瘤丽蚌、环带丽蚌、短褶矛蚌共9个种间，这些特异带可以作为鉴定这些蚌类的分子分类依据。 4.用UPGMA方法，建立了南洞庭湖9属15种野生经济蚌类之间的聚类系统树。通过聚类分析表明，属间的遗传关系中，裂嵴蚌属和尖脊蚌属之间的遗传关系最近，遗传距离为0.4857，丽蚌属与其他属间的遗传关系最远，遗传距离为0.7292；为同属种间关系中，楔蚌属的圆头楔蚌和巨首楔蚌之间的遗传关系最近，遗传距离为0.3333；丽蚌属的三巨瘤丽蚌和环带丽蚌与背瘤丽蚌之间的遗传关系最远，遗传距离为0.6782；种内的遗传关系中遗传变异最少的为环带丽蚌，其样本之间的遗传距离为0.0125；种内遗传变异最大的为鱼尾楔蚌，其样本之间的遗传距离为0.1081。

目录

文摘

英文文摘

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前言

材料与方法

结果与分析

讨论

结论

实验创新

后续工作

参考文献

附图:实验样本图片

附表:实验样本的形态学测量及分析结果

致谢

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