明尼苏达被毛孢（Hirsutella minnesotensis）相关种分类及其分子生态学研究

摘要

本研究对食线虫被毛孢及其相关种进行了分类研究；建立了明尼苏达被毛孢实时荧光定量PCR检测体系；将实时荧光定量PCR检测方法应用于田间土样明尼苏达被毛孢的检测；实时荧光定量PCR结合寄生率测定方法，研究土壤因子对明尼苏达被毛孢在土壤中的定殖和寄生活性。 线虫内寄生被毛孢及其相关种的分类。线虫内寄生被毛孢不同种及菌株间存在着形态、致病性和遗传多样性，明尼苏达被毛孢与寄生螨类的汤普森被毛孢(H.thompsonii)在形态上极为相似，针对这些问题进行了形态学和rDNAITS和MAPK基因分析研究，发现寄生腐生线虫的被毛孢新种--线虫被毛孢(Hirsutellavermicolasp.nov.)。该新种与洛斯里被毛孢的区别主要是产孢细胞顶部呈螺旋状，对植物寄生线虫不寄生或寄生性很弱。同时证明汤普森被毛孢的三个变种划分不成立，修订了汤普森被毛孢种的特征，进一步证明明尼苏达被毛孢与汤普森被毛孢是完全不同的种。 明尼苏达被毛孢实时荧光定量PCR体系。明尼苏达被毛孢是我国大豆胞囊线虫幼虫最重要的寄生菌，可能是我国大豆胞囊线虫自然衰退的主要生防因子，通过对明尼苏达被毛孢rDNAITS区分析，设计出特异性的上游引物5’-GGGAGGCCCGGTGGA-3’和下游引物5’-TGATCCGAGGTCAACTTCTGAA-3’以及TaqMan探针5’-CGTCCGCCGTAAAACGCCCAAC-3’，通过PCR反应体系优化、专化性和孢子灵敏度测定，建立了特异性的对土壤中明尼苏达被毛孢定量测定的实时荧光定量PCR体系，并且理论上能够检测到4个孢子/g土。 实时荧光定量PCR方法对田间土样的检测。利用建立的实时荧光定量PCR方法结合幼虫寄生率分析，对采自黑龙江省大豆田的20份土样进行了研究，在9份土样中分离到明尼苏达被毛孢，3份土样既没有幼虫寄生也没有检测到明尼苏达被毛孢的DNA，在有真菌寄生的17份土样中，6份土样能够检测到明尼苏达被毛孢，包括了所有幼虫寄生率大于10％的5份土样。这些结果证明实时荧光定量PCR能够定量检测自然土壤样品中的明尼苏达被毛孢，与寄生率分析存在一定的相关性，但又有所不同，寄生率分析是检测明尼苏达被毛孢在土壤中的活性，而实时荧光定量PCR是检测土壤中明尼苏达被毛孢的生物量，两种方法的结合能够提供明尼苏达被毛孢在土壤中更多的信息。 环境因子对明尼苏达被毛孢在土壤中的定殖及寄生活性的影响。结合寄生率分析和实时荧光定量PCR方法在试管土中研究了土壤湿度、温度和质地对明尼苏达被毛孢在土壤中的定殖和寄生活性的影响，证明在土壤温度、湿度较低和粘性土壤中明尼苏达被毛孢的DNA含量较高、生物量较大，而明尼苏达被毛孢对大豆胞囊线虫幼虫寄生率是在10-15℃的土壤温度下、6-10％土壤湿度下以及粘性土壤中最高。随着土壤温度和湿度增加以及土壤含沙量增加，明尼苏达被毛孢在土壤中的DNA含量显著降低，表明这些土壤条件不利于明尼苏达被毛孢的定殖，而寄生率与DNA含量并不相关，各有其特定的环境条件要求。

目录

文摘

英文文摘

独创性声明及关于论文使用授权的说明

第一章 植物寄生线虫的生物防治及分子生态学研究进展

第二章 食线虫被毛孢及相关种的分类

第三章 明尼苏达被毛孢实时荧光定量PCR检测体系的建立

第四章 田间土壤样品中被毛孢的实时荧光定量PCR检测

第五章 土壤环境因子对明尼苏达被毛孢动态影响

结论

参考文献

论文缩略词表

致谢

作者简历

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