杀虫晶体蛋白和低聚异麦芽糖的毛细管电泳分析

摘要

该文利用毛细管电泳对苏云金杆菌杀虫晶体蛋白和低聚异麦芽糖产品中主要组分的测定方法进行了研究,结果如下:通过石油醚萃取和双水相萃取相结合的方法提取了纯度达95﹪的伴胞晶体.将菌株HD-73的伴胞晶体在碱性条件下溶解,在酸性条件下沉淀进行初步提纯杀虫晶体蛋白,再通过DEAE-纤维素柱层析进一步化,作为标准用于进一步的定性和定量分析.初步发展了毛细管区带电泳法和毛细管凝胶电泳法分析检测杀虫晶体蛋白的方法.其中毛细管区带电泳的条件为:毛细管为40cm(有效长度为30cm)、内径75μm的末涂层的石英毛细管;以50mmol/L硼砂(pH9.5)、3.5mmol/LSDS、20﹪(v/v)乙腈、0.1﹪β-巯基乙醇为运行缓冲液,柱温25℃,检测波长280nm,压力进样(0.5psi×10sec ),分离场强为250V/cm.杀虫晶体蛋白可以在10分钟之内得到快速分离.在0.05~0.40mg/ml范围内,浓度与峰面积具有很好的线性关系(相关系数为0.9997);毛细管凝胶电泳的条件为:毛细管为40cm(有效长度30cm)×50μmI.D的中性涂层的石英毛细管,0.1mol/L Tris-CHES(pH 8.6)添加0.1﹪SDS、2.5﹪PEO作为运行缓冲液,分离场强为300V/cm,柱温25℃,检测波长214nm.建立了柱前衍生化测定低聚异麦芽糖中主要组分的毛细管电泳方法.在末涂渍的石英毛细管中,以75mmol/L硼砂(pH10.5)为运行缓冲液,在检测波长214nm、分离电压15kV下对低聚异麦芽糖主要组分的α-萘胺衍生物进行快速地分离测定.结果表明,该方法重现性好,迁移时间和峰面积的相对标准偏差分别在0.5﹪和2.0﹪以内.异麦芽糖、异麦芽三糖、潘糖浓度在0.005~1.000mg/ml范围内,含量均与其峰面积之间呈现良好的线性关系.该法灵敏度高、成本低,为测定低聚异麦芽糖产品中主要组分提供了一种高效快速的方法.

目录

摘要

Abstract

第一章毛细管电泳在蛋白质和糖的分离中的应用

1.1毛细管电泳的发展

1.2毛细管电泳的几种主要分离模式及其原理

1.2.1毛细管区带电泳

1.2.2胶束电动毛细管色谱

1.2.3毛细管凝胶电泳

1.2.4毛细管等电聚焦

1.2.5毛细管电色谱

1.2.6亲和毛细管电泳

1.2.7毛细管等速电泳

1.3蛋白质的毛细管电泳

1.3.1蛋白质的毛细管电泳分离模式

1.3.2毛细管电泳在蛋白质分析中的应用

1.4糖的毛细管电泳

1.4.1使糖带电荷

1.4.2糖的衍生化

1.4.3糖的检测

1.4.4糖的毛细管电泳分离模式

第二章苏云金芽胞杆菌杀虫晶体蛋白的毛细管电泳分析

2.1文献综述

2.1.1伴胞晶体纯化方法

2.1.2苏云金芽胞杆菌ICPs定量测定

2.2研究目的和意义

2.3材料与方法

2.3.1供试菌株

2.3.2苏云金芽胞杆菌培养基

2.3.3试剂

2.3.4仪器

2.3.5苏云金芽胞杆菌伴胞晶体的提纯

2.3.6苏云金芽胞杆菌毒素蛋白的SDS-PAGE定量

2.3.7原毒素蛋白的分离与纯化

2.3.8 DEAE纤维素柱层析

2.3.9毛细管区带电泳

2.3.10毛细管凝胶电泳

2.4结果与讨论

2.4.1伴胞晶体分离提纯方法的优化

2.4.2碱解条件的优化

2.4.3原毒素蛋白的纯化

2.4.4毛细管区带电泳分析

2.4.5毛细管凝胶电泳分析

2.5小结

第三章低聚异麦芽糖产品中主要组分的毛细管电泳分析方法研究

3.1文献综述

3.1.1低聚异麦芽糖的生理功能和应用

3.1.2低聚异麦芽糖主要组分的测定方法

3.2研究目的与意义

3.3材料与方法

3.3.1毛细管电泳系统

3.3.2试剂与样品

3.3.3标准品和样品的α-萘胺衍生化

3.3.4毛细管电泳条件

3.4结果与讨论

3.4.1电泳条件的优化

3.4.2线性范围、检测限

3.4.3样品分析与精密度测定

3.4.4回收率测定

3.5小结

第四章结论

参考文献

缩略语表

研究生阶段发表的相关论文

致 谢