黑木耳多糖AAP-Ⅱa级分的制备及其生物活性的研究

摘要

黑木耳是我国重要的食用菌作物之一。黑木耳中含有大量的活性成分一黑木耳多糖。近代，由于黑木耳多糖具有重大保健价值而倍受学术界重视，本文在前人的工作基础上开展了对黑木耳多糖AAP-Ⅱa级分的特性、结构以及生物活性，包括抗菌作用、抑制肿瘤作用、抗衰老抗心肌缺血及其分子作用机理等的系统研究。主要研究结果如下： 1.黑木耳多糖AAP-Ⅱa级分的化学特性表征 将市售黑木耳干品去杂、粉碎、脱脂、浸提(超声波协同酶法)、离心或过滤、浓缩，醇沉、酶与Sevage复合法脱除蛋白质，经冷冻干燥后，即得黑木耳多糖。 黑木耳多糖的平均提取率为8.58％。采用DEAE SephadeX A-25色谱柱对脱除蛋白质后的黑木耳多糖进行分级，并用Sepbadex G-200凝胶色谱柱纯化，得到黑木耳多糖AAP-Ⅱa级分，该级分得率为4.59％。并对AAP-Ⅱa级分的纯度和理化特性进行了鉴定。经过液相色谱，纸层析分析说明，AAP-Ⅱa级分是由葡萄糖、岩藻糖、甘露糖、葡萄糖醛酸和鼠李糖组成的杂多糖，摩尔比例为11.52:1.27:1.00:0.61:0.23。凝胶柱层析法测得其平均分子量为165000。AAP-Ⅱ a级分中中性糖含量为58.93％，葡萄糖醛酸的含量为33.82％；蛋白质含量为1.90％：钙、镁、硒、铁元素含量分别为：3.01mg／g、2.23mg／g、23.51ttg／g和1.04mg／g。采用原子力显微镜和扫描电镜观察了多糖分子的形貌。推测糖分子在固态时是产生大的岛屿状的宏观聚集，分子间分子内结合致密。 2.黑木耳多糖AAP-Ⅱa级分的抗菌效果研究 结果表明，AAP-Ⅱa级分对大多数革兰氏阳性细菌和革兰氏阴性细菌均有较强的抑菌作用，对部分酵母菌也有良好的抑制生长作用，且抑菌所需浓度低，抑菌pH值作用范围广、热稳定性强，其抗菌效果略低于苯甲酸钠，对霉菌没有明显的抑制作用。 3.黑木耳多糖AAP-Ⅱa级分对肝癌H22细胞的生长抑制作用 通过体内给药，结果显示AAP-Ⅱa级分能显著抑制肝癌H22细胞的生长，同时明显提高了荷瘤小鼠的免疫器官重量，促进小鼠淋巴细胞的增殖作用和迟发型超敏反应强度，增强免疫作用等，其作用效果与剂量呈正相关。上述结果提示，AAP-Ⅱa级分的体内抗肿瘤活性是通过增强机体的免疫活性来实现的。另外它可使荷瘤小鼠血清的SOD含量升高，MDA值降低。说明其抗肿瘤活性还与其抗氧化活性有关。 4.黑木耳多糖AAP-Ⅱa级分的抗衰老作用 实验表明，AAP-Ⅱa可降低小鼠体内MDA和脂褐素含量，并能抑制衰老模型小鼠体内MDA和脂褐素含量的升高，说明AAP-Ⅱa对细胞结构和细胞物质(如脂质、蛋白质等)具有良好的保护作用。AAP-Ⅱa能提高小鼠体内GSH-Px活性和SOD活性，甚至在衰老模型的某些器官中，它们的活性高于正常对照组。 5.黑木耳多糖AAP-Ⅱa级分抗衰老的作用机理 通过DNA“ladder”和流式细胞仪检测发现，一定浓度的AAP-Ⅱa可以调节胸腺细胞的细胞周期，并能在一定程度上抑制胸腺细胞过度凋亡，降低其凋亡率。AAP-Ⅱa能下调促凋亡的Fas基因的转录，并上调抗凋亡的Bc1-2基因的转录，说明AAP-Ⅱa在调控细胞凋亡方面具有下调促凋亡基因表达及上调抗凋亡基因表达的协同作用，从而重塑凋亡调控基因表达的平衡状态，逆转衰老时细胞过度凋亡的趋势从而延缓衰老。 6.黑木耳多糖AAP-Ⅱa级分的抗心肌缺血活性 实验证明AAP-Ⅱa具有改善心肌缺血的作用。同时还能降低血压，而对心律没有明显影响：AAP-Ⅱa 50mg·Kg<'-1>组在改善心电图ST段的上移作用较明显，且有一定程度的缩小心肌梗塞区面积的作用。提示AAP-Ⅱa在抗氧自由基这一保护缺血心肌的重要途径中有显著作用，这可能是AAP-Ⅱa抗心肌缺血、保护缺血时心肌细胞损伤的机制之一。首次报道AAP-Ⅱa能显著提高血清中PGI<,2>代谢产物6-KetoPGF<,lα>的水平，而对TXA<,2>的代谢产物TXB<,2>水平的影响不显著，即能促进促缺血心肌组织PGI<,2>的合成，这可能是AAP-Ⅱa保护心肌缺血的又一机制。实验同时发现，结扎大鼠冠脉后血清中NO为水平显著降低，而ET含量明显升高，说明结扎大鼠冠脉后血管舒缩因子失去正常的平衡状态，而中高剂量的AAP-Ⅱa可显著的调整恢复这种状态。

目录

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摘要

英文缩略语表

前言

第一章黑木耳多糖AAP-Ⅱa级分的制备与纯度鉴定

第二章黑木耳多糖AAP-Ⅱa级分的基本化学结构表征

第三章黑木耳多糖AAP-Ⅱa级分的抗菌效果研究

第四章黑木耳多糖AAP-Ⅱa级分抗肿瘤作用的研究

第五章黑木耳多糖AAP-Ⅱa级分抗衰老活性的研究

第六章黑木耳多糖AAP-Ⅱa级分抗衰老作用的分子机理研究

第七章黑木耳多糖AAP-Ⅱa级分抗心肌缺血的实验研究

第八章结论

第九章文献综述:食药用真菌多糖生物活性研究

致谢

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