展青霉素完全抗原的合成及多克隆抗体的制备

摘要

展青霉素（Patulin, PAT）是曲霉、青霉和丝衣霉产生的次生代谢产物，对动物有致畸、致突变和致癌性，如何及时、快速有效的检测出食品中展青霉素的残留成为国内外研究的方向。展青霉素的检测方法有薄层色谱法、气相-质相联机色谱法、液相色谱法等，由于免疫检测法具有方便快捷、成本低等优点，成为展青霉素检测研究的热点。本研究通过对展青霉素进行修饰，利用碳二亚胺法制备出PAT的完全抗原后，制备出了展青霉素的多克隆抗体，并对其抗体进行了鉴定。为建立展青霉素的免疫检测奠定了基础。 本实验为了增加PAT和载体蛋白的联接的效率，首先通过用丁二酸酐将PAT加以修饰以增加其羧基，生成PAT的衍生物（PAT-HS），并通过气相-质相联机加以签定；同时对作为载体蛋白的牛血清白蛋白（BSA）也采用乙二胺进行修饰以增加其氨基（EDA-BSA）。然后EDA-BSA与载体蛋白卵清白蛋白（OVA）分别与PAT-HS连接得到免疫抗原（PAT-HS-EDA-BSA）和检测抗原（PAT-HS-OVA）。 将制备好的免疫抗原PAT-HS-EDA-BSA免疫小鼠，每隔14d加免1次，从第3次加强免疫后开始，加免后第8d，尾静脉采血测定抗血清效价。达到一定效价后，眼球采全血，分离抗血清。采用辛酸-硫酸铵法纯化抗血清，应用间接ELISA法测定抗PAT多克隆抗体的效价和抗原的最佳工作浓度，抗血清的效价为1：40000，抗原的最佳工作浓度为0.5 ug/mL。抗体的特异性也通过间接ELISA法得到充分的证明。 本研究以抗PAT多克隆抗体为基础，确立了PAT免疫学检测方法，同时对相关条件如酶标反应板均—性的测定、PAT-HS-OVA包被条件、封闭液、封闭时间、酶标二抗最佳反应浓度、酶标二抗的最佳反应时间、底物反应时间、底物中不同H202浓度进行了优化，为制备展青霉素的单克隆抗体和建立展青霉素的免疫学检测方法奠定了基础。

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文摘

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前言

文献综述一展青霉素毒性及其检测方法的研究进展

文献综述二蛋白质偶联方法及其应用

实验一展青霉素衍生物的完全抗原的合成

实验二展青霉素多克隆抗体的制备及免疫学检测方法的建立

结论

参考文献

致谢

附录