龙须草愈伤组织的诱导及植株再生植物细胞骨架标记及检测方法初探

摘要

以禾本科无融合生殖植物龙须草的成熟种子为材料，对其愈伤组织的诱导、继代及其分化进行了研究，建立了愈伤组织诱导及植株再生体系。主要结果如下： 1.与其他禾本科植物一样，龙须草成熟胚主要对2，4-D比较敏感，能够诱导出较好的愈伤组织。其他常用植物激素效果不明显。 2.以MS为基本培养基，附加2.5mg/L的2,4-D，琼脂粉8g/L，蔗糖30g/L，28℃下暗处培养，龙须草成熟种子的愈伤组织诱导率为97.27％。培养基中添加脯氨酸和谷氨酰胺对愈伤组织的诱导有一定的促进作用，而添加脱落酸时抑制愈伤组织的形成。愈伤组织继代培养时，仍以上述条件为佳。 3.适宜的愈伤组织分化培养基为MS+6-BA 2.0mg/L+NAA0.1 mg/L，分化率达到29.7％。 4.幼嫩的叶片不能诱导出愈伤组织。在其他禾本科植物中应用较多的N6和HB等培养基，对龙须草愈伤组织的诱导效果较MS为差。 细胞骨架在细胞中除了具有维持形状的作用外，还参与众多重要的生理活动。但是植物材料细胞骨架的标记由于植物组织、细胞本身固有的特点存在较大的困难。目前对植物细胞骨架标记进行研究的报道相对较少，可供参考借鉴的标记及检测方法不多。本实验以枇杷花粉为材料，进行了细胞骨架的几种标记及检测方法的比较研究，结果如下： 1.以考马斯亮蓝R250为染色剂，将材料固定后去除非骨架蛋白，考马斯亮蓝非特异地结合骨架蛋白后，在光学显微镜下即可较清楚地观察骨架蛋白的分布趋势。其结果与其他方法所得结论符合。 2.利用鬼笔环肽专一结合微丝蛋白的特性，将结合有异硫氰酸荧光素的鬼笔环肽作为标记物，通过普通荧光显微镜和激光扫描共聚焦显微镜观察、摄像，可以得到较清晰的荧光图像，显示的微丝网络结构清楚，明亮。 3.通过免疫荧光技术对微管蛋白进行标记，结合荧光显微技术观察、摄像，能够清楚地得到微管分布的图像。 4.三种方法互相比较，所得结果基本一致。考马斯亮蓝法简便、快速、易操作，成本低。以鬼笔环肽荧光探针和免疫荧光标记的方法分别只检测微丝和微管，虽然成本较高，步骤比较繁琐，但是因其特异结合的特点，结果比较可靠，而且由于其图像清晰，对于细致地研究一些植物生理、生化问题，有着更重要的作用。

目录

论文说明：缩略语表

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摘要

第一章龙须草愈伤组织的诱导及植株再生

1综述

1.1龙须草分类及分布

1.2龙须草的特性

1.3龙须草的研究进展

1.4植物组织培养

课题的提出和研究的意义

2材料与方法

2.1实验材料

2.2方法

3结果与分析

3.1愈伤组织诱导激素种类的筛选

3.2愈伤组织的诱导及再生

3.3愈伤组织继代培养

3.4愈伤组织分化及植株再生

3.5分化苗的生根及移栽

4 讨论

4.1基本培养基对龙须草愈伤组织诱导的影响

4.2激素 2，4-D浓度和其它添加物对龙须草愈伤组织诱导的影响

4.3其它种类激素在实验中的作用

4.4存在的问题及对策

第二章植物细胞骨架标记及检测方法初探

1综述

1.1微丝、微管的基本组成与结构

1.2细胞骨架及其标记、检测方法的研究进展

课题的提出和研究的意义

2材料与方法

2.1枇杷花粉管中微丝荧光标记

2.2枇杷花粉管中微管荧光标记

2.3枇杷花粉管细胞骨架考马斯亮兰法染色标记

3结果与分析

3.1枇杷花粉管中微丝荧光标记

3.2枇杷花粉管中微管荧光标记

3.3枇杷花粉管细胞骨架考马斯亮兰法染色标记

4讨论

4.1实验材料对荧光标记结果的影响

4.2染色方法对细胞骨架标记的准确性的比较

4.3荧光显微镜与激光共聚焦扫描显微镜效果的比较

4.4标记材料及标记方法存在的问题及对策

参考文献

图版与图版说明

致谢