超饲养对鹅肝脏差异表达基因转化生长因子β2基因表达的影响

摘要

超饲养(Overfeeding)引起鹅肝脏代谢发生改变，使得大量脂肪沉积在肝脏中形成肥肝(fattyliver)。但目前鹅肥肝形成的分子机理仍然不清楚。 本研究以朗德鹅和溆浦鹅为试验材料，使用了90对引物进行mRNA差异显示分析，总共分析了大约800条cDNA片段，最后，经过检验，共确定了超饲养后的6个差异表达基因，其中，基因9105的表达水平上调了。在mRNA差异显示分析的基础上，并对基因9105进行了预测，预测结果表明基因9105的cDNA序列含有一个1239bp的开放读码框架(ORF)，与鸡和其它物种的转化生长因子β2基因(transforminggrowthfactor-beta2，TGF-β2)同源。编码一个412个氨基酸的蛋白。蛋白质序列存在2个保守的功能域，即一个引导序列(TGF-β前肽)，一个是功能结构域(TGF-β)。该蛋白质与鸡、非洲爪蛙、短尾猊、人、猪、牛、绵羊、小鼠、大鼠的TGF-β2蛋白分别具有99％、96％、91％、90％、90％、89％、89％、88％、87％的同源性。相对定量RT-PCR结果表明鹅基因9105在多种组织中表达，其表达量在肌胃中最高，其次足肝脏、脾脏和卵巢，然后是子宫、肺和肌肉，最低的是肾脏和腹脂。

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文摘

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论文说明：缩略词表

声明

1文献综述

1.1鹅肥肝的形成

1.2鹅生产肥肝差异形成原因

1.3基因差异表达的研究方法

1.3.1差别杂交

1.3.2消减杂交

1.3.3 cDNA代表性差异分析

1.3.4抑制性扣除杂交

1.3.5基因表达系列分析

1.3.6 cDNA-AFLP

1.3.7 mRNA差异显示技术

1.3.8 cDNA微阵列

1.4差异表达基因的鉴定方法

1.4.1 Northern杂交和反向Northern杂交

1.4.2半定量RT-PCR

1.4.3实时定量PCR

2研究的目的和意义

3材料与方法

3.1实验材料

3.1.1试验鹅的饲养和组织样品的采集

3.1.2主要试剂与配制

3.1.3菌株

3.1.4主要仪器和设备

3.2实验方法

3.2.1总RNA的提取和RNA质量检测

3.2.2反转录和mRNA差异显示

3.2.3聚丙烯酰胺凝胶电泳及银染

3.2.4 PCR产物的重扩增、纯化、克隆和测序

3.2.5差异表达基因的实时定量PCR鉴定

3.2.6差异显示EST的半定量RT-PCR组织表达分析

3.2.7核酸序列和氨基酸序列分析

4结果与分析

4.1总RNA及反转录cDNA模板的检测

4.1.1总RNA的甲醛变性胶电泳检测结果

4.1.2 cDNA模板质量及引物扩增效果的检测

4.2鹅肝脏差异表达基因的分离

4.3基因9105的克隆、鉴定、序列分析和组织表达谱

4.3.1基因9105全长CDS的获得

4.3.2实时定量PCR(real-time PCR)的鉴定

4.3.3核苷酸及氨基酸序列分析

4.3.4基因9105在其它组织中的表达特征

4.4其他五个基因的克隆与鉴定

5讨论

5.1采用朗德鹅和溆浦鹅基因表达模式的mRNA差异显示

5.2差异表达基因的确定

5.3关于TGF-β2基因

5.4超饲养诱导基因9105表达水平上升的可能机理

6小结

6.1试验获得的结果

6.2本研究的创新点与特色

6.3本研究的不足

参考文献

附录

致谢