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论文说明:缩略语(Abbriviations)
声明
1文献综述
1.1链霉菌及其研究简介
1.2阿维链霉菌(Streptomyces avermitilis)简介
1.2.1阿维菌素生物合成基因簇
1.2.2阿维菌素生物合成
1.2.3白基因(whi)
1.2.4灰黑色孢子色素合成基因簇
1.3聚酮化合物
1.4阿维菌素高产菌株育种和代谢工程的研究
1.4.1构建高产菌株
1.4.2提高特定组分的产率
1.4.3添加前体物质增加阿维菌素的产量
1.5链霉菌双组分调控机制
1.6本课题研究的立论依据、目的、意义
2材料与方法
2.1菌株
2.2质粒与引物
2.3培养基与生化试剂
2.4实验方法
2.4.1链霉菌培养及菌种保藏
2.4.2大肠杆菌质粒DNA的小量提取方法
2.4.3大肠杆菌质粒DNA的少量快速提取及检测
2.4.4链霉菌总DNA的提取方法
2.4.5氯化锂纯化DNA方法
2.4.6酶连反应
2.4.7大肠杆菌和链霉菌的两亲本属间接合转移方法
2.4.8大肠杆菌感受态细胞的制备(CaCl2法)及转化
2.4.9 DNA片段凝胶回收(试剂盒回收)
2.4.10 AT克隆
2.4.1l PCR及相关技术
2.4.12 Southern杂交
2.4.13阿维菌素的HPLC测定
3结果与分析
3.1 whiEa基因簇的基因置换
3.1.1基因置换和基因中断的原理
3.1.2 whiEa基因簇置换载体的构建
3.1.3染色体上whiEa基因簇的基因置换
3.1.4置换菌株发酵产物的HPLC分析
3.2 PhoR-PhoP双组分信号系统对阿维链霉菌的形态分化及阿维菌素生物合成的影响
3.2.1 PhoR-PhoP的序列分析
3.2.2阿维链霉菌phoR-phoP基因置换载体的构建
3.2.3阿维链霉菌phoR-phoP基因置换菌株筛选及其基因型验证
3.2.4.phoR-phoP基因置换菌株的表型观察
3.2.5.phoR-phoP基因置换菌株的遗传互补
3.2.6 phoR-phoP基因置换菌株发酵产物的HPLC分析
4总结与讨论
4.1总结
4.2讨论
4.3展望
参考文献
致谢