基于CT-1 DNA及rDNA的甘蓝型油菜和甘蓝的荧光原位杂交核型分析

摘要

为了探索一种高效可靠的芸薹属植物核型分析方法，以甘蓝型油菜中油821、甘蓝黑叶小平头为材料，分别从其基因组DNA中分离出Cot-1DNA，用生物素标记做探针，同时用地高辛标记的rDNA做探针，对两种材料有丝分裂中期相染色体分别做单色和双色荧光原位杂交。 通过对甘蓝型油菜中油821的单色荧光原位杂交，将Cot-1DNA杂交带定位于第1，5，7，9和11号染色体长臂，第4，6，8，10，12，15，17，18和19号染色体短臂，第2，3，13，14，和16号染色体周着丝粒位置。 通过对甘蓝黑叶小平头的双色荧光原位杂交，将Cot-1DNA杂交带定位于第3和第9号染色体长臂，第4，5，7和第8号染色体短臂，第1，2和第6号染色体周着丝粒位置；25SrDNA定位于第4和第7号染色体的短臂，其中第4号染色体上的荧光信号特别强；有1对染色体上检测有5SrDNA基因座，杂交信号较弱。根据染色体长度和着丝点位置，确定了甘蓝黑叶小平头的核型公式为2n=2x=18=18m+2sm，核型为2B型。 Cot-1DNA在甘蓝型油菜、甘蓝黑叶小平头的每一条染色体上都有特异性的荧光杂交带，并且信号稳定，同源染色体在相同的位置有Cot-1DNA荧光带，而非同源染色体有不同的Cot-1DNA荧光带型。在甘蓝中，有25SrDNA的杂交信号的位点同时也有Cot-1DNA的杂交信号，证实了Cot-1DNA与25SrDNA二者具有一致性的染色体位置特征。 基于传统的根据染色体长度和臂比值的分析，以及Cot-1DNA和25SrDNA杂交带的位置和长度，对甘蓝黑叶小平头的核型进行了更有效的构建，并绘制了其基于双色FISH核型模式图。研究发现，基于Cot-1DNA和rDNA的双色FISH并结合传统的核型分析技术，优于目前普遍采用的只基于rDNA或Cot-1DNA一种探针的FISH，也优于只基于染色体形态的核型分析方法，它将有助于植物的核型分析和物理图谱的构建。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表

声明

1前言

1.1 原位杂交研究进展

1.1.1原位杂交基本原理

1.1.2研究概况

1.1.3研究技术、方法进展与应用

1.2 rDNA在植物核型分析中的应用

1.3 Cot-1 DNA的研究

1.4 本试验的目的和意义

2 材料与方法

2.1 材料

2.2 方法

2.2.1染色体制备

2.2.2基因组DNA抽提

2.2.3基因组DNA处理及Cot-1 DNA分离

2.2.4 rDNA的准备

2.2.5探针标记及检测

2.2.6荧光原位杂交与检测

3 结果与分析

3.1 基因组DNA提取

3.2 基因组DNA处理及Cot-1 DNA分离

3.3 rDNA制备结果

3.4 探针标记检测结果

3.4.1切刻平移法标记

3.4.2试剂盒标记

3.5 荧光原位杂交与核型分析

3.5.1 甘蓝型油菜中油821基于Cot-1 DNA的核型分析

3.5.2 甘蓝黑叶小平头基于Cot-1 DNA和rDNA的核型分析

4 讨论与结论

4.1讨论

4.1.1中油821、甘蓝黑叶小平头Cot-1 DNA含量比较

4.1.2 Cot-1 DNA及rDNA原位杂交与核型分析

4.2结论

参考文献

图版

附录

致谢

攻读硕士期间发表论文清单