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缩略语表
第一章 前言
1.1 双砷染料-四半胱氨酸系统简介
1.2 TC标签的应用
1.3 TC标签与GFP标签比较
1.4 其它化学标签
1.5 本研究的目的和意义
第二章 大肠杆菌烯酰ACP还原酶的标记及分析
2.1 前言
2.2 材料与方法
2.2.1 主要仪器与试剂
2.2.2 培养基
2.2.3 分子克隆方法
2.2.4 载体构建
2.2.5 菌种培养与蛋白纯化
2.2.6 酶活测定方法
2.2.7 体外染色
2.2.8 体内染色
2.2.9 CZE分析
2.2.10 HPLC分析
2.2.11 SPF分析
2.2.12共聚焦显微镜分析
2.2.13 SDS-PAGE在胶分析
2.3 结果与分析
2.3.1 实验中用到的菌株和质粒
2.3.2 最适酶量与最适底物浓度的确定
2.3.3 染色前标签对酶活力的影响
2.3.4 染色后对酶活力的影响
2.3.5 染料与标签结合稳定性分析
2.3.6 定量分析
2.3.7 活细胞显影
2.3.8 体内染色后的CZE分析
2.4 讨论
2.4.1 TC标签与EGFP标签的比较分析
2.4.2 CZE分析的条件优化
2.4.3 染料与TC标签结合稳定性分析
2.4.4 TC与HPLC连用开拓了应用新领域
第三章 E.coli超量表达holo-ACP的定量分析
3.1 前言
3.2 材料与方法
3.2.1 主要仪器与试剂
3.2.2 培养基配方
3.2.3 分子克隆方法
3.2.4 载体构建
3.2.5 菌种培养与蛋白纯化
3.2.6 体外延伸反应
3.2.7 体外染色
3.2.8 体内染色
3.2.9 ACP的MEKC分析
3.3 结果与分析
3.3.1 实验中用到的菌株
3.3.2 诱导表达后的Native-PAGE分析
3.3.3 体外染色后的Native-PAGE分析
3.3.4 体外反应后的Native-PAGE分析
3.3.5 体内染色后的共聚焦显微镜检测
3.3.6 体外染色后的MEKC分析
3.4 讨论
3.4.1 TC标签对蛋白纯化带来的困难
3.4.2 TC标记的背景来源分析以及应对策略
第四章 结论与展望
4.1 结论
4.2 展望
参考文献
致谢
附录
附图1:载体pB-lu-fabⅠ的构建过程图
附图2:载体pET-Nt-fabⅠ的构建过程图
附图3:载体pET-Wt-fabⅠ的构建过程图
附图4:载体pET-Ct-fabⅠ的构建过程图
附图5:载体pET-Bt-fabⅠ的构建过程图
附图6:载体pET-Gt-fabⅠ的构建过程图
附图7:载体pB-lu-ACP的构建过程图
附图8:载体pET-AcpS的构建过程图
附图9:载体pB-lu-ACP-AcpS的构建过程图
附图10:载体pB-lu-his的构建过程图
附图11:载体pB-lu-ACP-his的构建过程图
附图12:载体pGEX-6p-ACP的构建过程图
附图13:载体pGEX-6p-ACP-AcpS的构建过程图