桃砧木毛桃离体培养和植株再生的研究

摘要

建立高效稳定的离体再生体系是进行遗传转化的基础和前提。桃的离体再生较为困难，很大程度上阻碍了桃现代生物技术育种的进程。本试验以南方桃区主要砧木毛桃(Prunus persica)为试材，利用茎段离体培养获得的无菌苗叶片为外植体，通过对基本培养基类型、激素种类和浓度配比，碳源和暗培养时间等一系列因素的研究，初步建立了桃砧木毛桃叶片离体再生和愈伤组织诱导、保存及植株再生体系，为桃后续的遗传转化研究奠定了一定的基础。主要研究结果如下：
　　 1.2010年5-6月进行毛桃茎段腋芽诱导，萌发率可达76.6%，且生长状况良好。毛桃试管苗较适宜的增殖培养基为：LP基本培养基+6-BA0.75 mg/L+IBA0.30mg/L+腺嘌呤3.00 mg/L+蔗糖30.0 g/L+琼脂6.8 g/L，pH为5.8-6.0，每隔30 d左右继代一次。
　　 2.在毛桃叶片植株再生时先进行21 d的暗培养后更换到新鲜培养基进行光培养，暗光培养时培养基均为：SH基本培养基+TDZ3.0 mg/L+NAA0.3 mg/L+蔗糖30.0 g/L+琼脂6.0 g/L，pH为5.8-6.0，最高再生率可达11.67%。
　　 3.毛桃试管苗较适宜的生根培养基为：1/2LP基本培养基+IBA1.0 mg/L+NAA0.1 mg/L+蔗糖20.0 g/L+琼脂6.8 g/L，pH为5.8-6.0。培养30 d生根率可达73.34%，平均每棵试管苗生根条数为3条，平均根长为4.81 cm。
　　 4.毛桃叶片愈伤组织诱导较佳培养基为：LP基本培养基+6-BA1.0 mg/L+2，4-D3.0 mg/L+AgNO30.5 mg/L+蔗糖30.0 g/L+琼脂6.0 g/L，pH5.8-6.0，选取继代30 d左右的毛桃试管苗的幼嫩茎段(不带腋芽)或叶片作为外植体，暗培养21d后转移至光培养。
　　 5.毛桃愈伤组织继代保存的较佳培养基为：LP基本培养基+2，4-D1.5mg/L+CH0.4 g/L+CA3.0 g/L或PVP3.0 g/L+蔗糖30.0 g/L+琼脂5.8 g/L，pH5.8-6.0，每28 d继代一次，持续暗培养进行保存。

目录

文摘

英文文摘

缩略词表

1 前言

1.1 问题的提出

1.2 桃外植体培养的研究进展

1.2.1 茎尖和茎段培养

1.2.2 胚培养

1.2.3 叶片培养

1.2.4 其他外植体的培养

1.3 愈伤组织诱导及植株再生

1.3.1 影响愈伤组织诱导的因素

1.3.2 愈伤组织再生不定芽

1.4 本研究的目的和意义

2 材料和方法

2.1 试验材料

2.2 试验方法

2.2.1 毛桃茎段培养

2.2.2 毛桃试管苗增殖培养

2.2.3 毛桃叶片植株再生

2.2.4 激素对毛桃试管苗生根培养的影响

2.2.5 毛桃愈伤组织诱导

2.2.6 愈伤组织的继代保存和植株再生

2.3 培养条件

2.4 试验数据统计方法

2.4.1 毛桃叶片植株再生

2.4.2 毛桃试管苗生根

2.4.3 毛桃愈伤组织诱导与保存

3 结果与分析

3.1 毛桃茎段培养

3.2 毛桃试管苗增殖培养

3.2.1 不同激素浓度配比对毛桃试管苗增殖的影响

3.2.2 不同基本培养基对毛桃试管苗增殖的影响

3.2.3 不同碳源对毛桃试管苗增殖的影响

3.3 毛桃叶片植株再生

3.3.1 不同激素浓度配比对毛桃叶片植株再生的影响

3.3.2 不同基本培养基对毛桃叶片植株再生的影响

3.3.3 是否更换培养基对毛桃叶片植株再生的影响

3.4 激素种类及浓度对毛桃试管苗生根的影响

3.5 毛桃愈伤组织诱导

3.5.1 不同时期愈伤组织形态观察

3.5.2 单一激素对毛桃愈伤组织诱导的影响

3.5.3 不同基本培养基、激素配比和AgNO3对毛桃愈伤组织诱导的影响

3.6 毛桃愈伤组织的继代保存及植株再生

3.6.1 基本培养基、碳源、激素配比和水解酪蛋白对愈伤组织继代保存的影响

3.6.2 暗培养时间对愈伤组织继代保存的影响

3.6.3 琼脂浓度对愈伤组织继代保存的影响

3.6.4 不同抗氧化剂对愈伤组织褐化的影响

3.6.5 毛桃愈伤组织再生不定芽

4 讨论

4.1 激素，基本培养基，碳源对毛桃试管苗增殖的影响

4.2 激素、基本培养基和光培养是否更换培养基对毛桃叶片植株再生的影响

4.3 基本培养基、激素、AgNO3对毛桃愈伤组织诱导的影响

4.4 愈伤组织再生植株困难的原因探讨

5 小结

参考文献

图版和图版说明

致谢

附录Ⅰ

附录Ⅱ 课题资助情况