副猪嗜血杆菌致病猪呼吸道蛋白酶激活受体2的定位与表达研究

摘要

副猪嗜血杆菌病是一种由副猪嗜血杆菌引起的以致病猪发生咳嗽、呼吸困难、跛行等症状为主的一类呼吸道疾病，随着养猪业规模的扩大，副猪嗜血杆菌病已经严重危害到养猪业的发展。蛋白酶激活受体2(proteinase-activated receptor-2，PAR-2)是G蛋白偶联受体家族成员之一，在生物体的多个组织器官都有表达，尤其是容易发生变态反应的组织如呼吸道组织、胃肠道组织等，PAR-2激活后可以刺激细胞分泌多种炎性介质和细胞因子，参与多种生理病理反应过程，并发挥调控作用。
　　 目前关于PAR-2的研究大多是采用人和大鼠的疾病模型，在猪尤其是自然感染病原的致病猪方面的研究还不多，本实验通过（疑似感染副猪嗜血杆菌的病猪）采集病猪呼吸道组织，进行细菌革兰氏染色及PCR鉴定确诊感染病原为副猪嗜血杆菌，HE染色观察病猪呼吸道的病理变化，免疫组织化学和实时荧光定量检测PCR-2在病猪呼吸道的定位与表达变化，从而研究副猪嗜血杆菌致病猪呼吸道蛋白酶激活受体2的分布、表达及意义。结果分析显示:
　　 (1)通过鉴定，确定所感染的病原为副猪嗜血杆菌。
　　 (2)HE染色观察致病猪:部分气道粘膜上皮细胞变性、脱落并且气道的完整性遭到破坏，气管固有层炎性细胞增多并有少量的出血，同时，在肺泡中伴有大量的炎性细胞浸润及浆液性的渗出。
　　 (3)免疫组织化学染色发现PAR-2在病猪呼吸道组织具有丰富的表达，尤其是在气道粘膜上皮的顶端及腺细胞的底部，另外，在成纤维细胞和中性粒细胞等炎性细胞中也有PAR-2的表达，所设对照组未见阳性反应。
　　 (4)在基因表达水平，与正常组相比，病例组中PAR-2的表达无论是气管组织(1∶2)还是肺组织(1∶1.4)都有明显的增加。
　　 结论:综上所述，PAR-2在猪呼吸道上皮中广泛存在，在猪生副猪嗜血杆菌病（呼吸道疾病）的过程中，PAR-2的表达明显增强，我们推测其表达水平的高低可能跟炎症反应的强度及疾病的发展进程存在一定联系，其中详细的调控途径还有待进一步的研究。

目录

声明

摘要

英文缩写词汇表

第一部分 文献综述

1 蛋白酶激活受体研究进展

1．1 概述

1．2 蛋白酶激活受体2研究概述

2 副猪嗜血杆菌病概述

2．1 概述

2．2 副猪嗜血杆菌病的诊断

2．3 副猪嗜血杆菌病的免疫及药物防治

3 免疫组织化学技术在科学研究中的应用

第二部分 实验部分

1 实验材料

1．1 实验动物

1．2 主要试剂及耗材

1．3 其他试剂及耗材

1．4 主要溶液的配制

1．4 主要仪器设备

2 试验方法

2．1 取材

2．2 副猪嗜血杆菌的鉴定

2．3 病理组织学观察

2．4 基因水平的表达研究

3 实验结果

3．1 副猪嗜血杆菌病的病理学观察

3．2 副猪嗜血杆菌的鉴定

3．3 副猪嗜血杆菌致病猪呼吸道的病理组织学结果观察

3．4 基因表达水平结果

第三部分 讨论与小结

1 讨论

1．1 副猪嗜血杆菌与呼吸道疾病

1．2 PAR-2在呼吸道的定位分析

1．3 PAR-2在呼吸道中的作用

1．4 实验技术方法的讨论

2 小结

参考文献

致谢