乙型脑炎血脑屏障破坏机制的探讨

摘要

乙型脑炎（Japanese encephalitis,JE）简称乙脑，是由日本乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus,JEV）感染所引起的一种人畜共患传染病。日本乙型脑炎病毒为黄病毒科黄病毒属的成员，主要经蚊虫传播。该病毒具有神经嗜性，可以从外周进入中枢神经系统（CNS），这是JEV导致人和动物发病、死亡的主要原因。血脑屏障（Blood Brain Barrier,BBB）破坏是乙脑主要的病理变化之一，但JEV感染引起BBB破坏的具体机制尚不清楚。由于乙型脑炎对人类和家畜产生严重的威胁，并且目前尚没有针对该病特异性的抗病毒药物，因此探究乙脑的发病机理，尤其是血脑屏破坏的机制，对该病的临床防治具有重要意义。
　　基于以上原因，我们开展了以下研究。首先，建立JEV感染C57BL/6小鼠模型。6-8周龄雌性C57BL/6小鼠尾静脉注射105 PFU JEV P3株。病毒感染后，小鼠呈现精神萎靡、体重下降等症状。有些感染小鼠出现神经症状，如运动失调，震颤。通过 HE染色发现脑组织内呈现典型的“血管袖套”和胶质细胞结节等病理变化。接下来取未发病、发病轻微、发病严重、濒死小鼠和对照组小鼠各3只，通过免疫组织化学、相对定量PCR和Western Blot对感染组和对照组小鼠的紧密连接蛋白和粘附分子进行检测。试验结果表明，JEV感染导致小鼠紧密连接蛋白（Tight junction proteins,TJs）表达下降，粘附分子表达增加。何种因素导致TJs表达下降，是JEV感染，还是JEV感染产生的炎症因子。为回答这一问题，我们进行了体外实验。发现JEV在小鼠脑微血管内皮细胞系bEnd.3细胞上感染率和复制率非常低。我们进一步利用症状明显的小鼠的脑上清对bEnd.3细胞进行处理，并用Western Blot检测TJs的表达，流式细胞术检测内皮细胞凋亡。结果表明，灭活病毒的小鼠脑上清处理能够下调内皮细胞TJs表达，并引起内皮细胞凋亡。这些发现表明BBB通透性增加及TJs表达下降不是由病毒感染引起的，而是由病毒感染诱导产生的炎症趋化因子/细胞因子导致的。

目录

声明

缩略语表（Abbreviation）

第一章 文献综述

1.1乙型脑炎的历史

1.2乙型脑炎的分布和流行病学

1.3乙型脑炎的病原学

1.4乙型脑炎的病理表现

1.5乙型脑炎的致病机理

1.6乙型脑炎的临床症状

1.7乙型脑炎的诊断、预防、控制及治疗

1.8目的与意义

第二章 材料与方法

2.1实验材料

2.2实验方法

第三章 结果与分析

3.1 JEV P3株毒价的测定

3.2脑组织病理学变化

3.3 JEV感染导致紧密连接蛋白表达下降

3. 5 JEV小鼠脑组织中粘附分子的变化

3.6 JEV感染bEnd.3细胞和BHK-21细胞

3.7 JEV在bEnd.3细胞上的增殖情况

3.8发病小鼠脑上清处理bEnd.3细胞后TJs的表达变化

3.9发病小鼠脑上清诱导bEnd.3细胞凋亡

4.讨论

4.1 JEV感染导致紧密连接蛋白表达下降

4.2 JEV感染诱导粘附分子表达上调

4.3 JEV对ECs的TJs表达无影响

4.4炎症因子诱导BBB的破坏

4.5炎症因子对ECs早期凋亡的影响

4.6 小结

结论

参考文献

致谢