石首保护区麋鹿致病性大肠杆菌分离鉴定与寄生虫感染调查

摘要

湖北石首麋鹿国家级自然保护区是我国三大麋鹿保护基地之一，区内麋鹿全部实现自然放养，现已形成全球最大的野生麋鹿种群。但在2010年前后，由于疫病的爆发，区内麋鹿出现大规模死亡（张林源等，2011）。本研究针对保护区内麋鹿致病菌及寄生虫的感染情况，对保护区内麋鹿的潜在病原进行调查，旨在为麋鹿疾病防控工作提供一定依据。
　　大肠杆菌为条件致病菌，在麋鹿机体免疫力下降时，会对麋鹿的健康构成威胁。本研究通过染色镜检、生化鉴定、16SrDNAPCR、小鼠毒力试验等方法从麋鹿心、肝、脾、肺等病料中分离到15株致病性大肠杆菌。采用Kirby-Bauer纸片法，选用14种常用抗生素对分离得到的15株致病性大肠杆菌进行药敏试验，结果显示，分离到的15株大肠杆菌对庆大霉素、卡那霉素、头孢唑林的高敏度均达到了100％;其次是对氯霉素、新霉素以及链霉素，高敏度均超过60％;耐药性方面，对克林霉素和磺胺嘧啶的耐药度分别为80％和60％。本研究为麋鹿致病性大肠杆菌的快速鉴定提供了方法，同时对针对该病治疗药物的选择有一定指导作用。此外，本研究基于相关文献报道，使用粘附素类、铁转运系统类、血清类、毒素类的fimH、kpsⅡ、papC、tsh、iss、iucD、irp2、cvi/cva、vat、sta、traTa、ompA等基因的相应引物对15株分离到致病性大肠杆菌进行了毒力基因的PCR扩增检测。按照扩增频率排列依次为ompA(100.00％)、traTa(80.00％)、iss(80.00％)、iucD(60.00％)、irp2(53.33％)、sta(33.33％)、vat(20.00％)，其中ompA、traTa、iss、irp2等基因的扩增频率较高。本次对麋鹿致病性大肠杆菌毒力基因的研究，为进一步探讨麋鹿大肠杆菌病的致病机理奠定了基础。
　　寄生虫病为野生动物的常见疾病，由于保护区内麋鹿所处自然环境复杂，寄生虫病病原种类繁多且分布广泛，当感染数量到达一定程度后，寄生虫病常造成麋鹿机体消瘦及机体免疫力下降，严重时甚至造成其大量死亡（沈华，2007）。本课题采用沉淀集卵法、饱和食盐水浮聚法、饱和糖水离心法、抗酸染色法等对保护区内145份麋鹿粪便进行了肠道寄生虫卵的检测。结果显示:寄生虫卵的总体检出率方面，吸虫卵最高，达67.58％;线虫卵、绦虫卵和球虫卵相对较少，分别为17.24％、15.86％及13.80％。前后盘吸虫卵的检出率高达53.10％，其次为带绦虫卵、蛔虫卵、艾美尔球虫卵，分别为15.86％、13.10％和8.28％。

目录

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摘要

缩略词表

第一部分 文献综述

1 麋鹿种群相关研究

1．1 麇鹿的历史分布及数量

1．2 中国糜鹿种群发展现状

1．3 石首麋鹿保护区概况

2 麇鹿疾病概述

2．1 鹿科动物寄生虫疾病

2．2 鹿科动物细菌疾病

2．3 其它鹿科动物疾病概述

2．4 糜鹿疾病防控研究

第二部分 石首保护区麇鹿致病性大肠杆菌的分离鉴定

1 材料与方法

1．1 实验材料

1．2 实验方法

2 结果

2．1 死亡麋鹿剖检观察

2．2 细菌形态观察

2．3 细菌生化鉴定结果

2．4 细菌16s rDNA鉴定结果

2．5 小鼠致病力试验

2．6 大肠杆菌毒力基因检测结果

2．7 药敏试验结果

3 讨论

第三部分 石首保护区麋鹿消化道寄生虫感染调查

1 材料与方法

1．1 粪样采集及编号

1．2 实验仪器

1．3 检查方法

2 结果

2．1 麋鹿粪便中检出的寄生虫卯及其形态观察

2．2 麋鹿粪便虫卵感染情况

2．3 麋鹿消化道寄生虫种类及感染强度

2．4 麋鹿前后盘吸虫EPG计数

3 讨论

参考文献

致谢