灵芝酸A人工抗原合成及流感病毒H7、N9的噬菌体抗体库抗体筛选

摘要

抗体作为机体免疫系统的重要成员，被用来识别并清除外来入侵物质。噬菌体抗体库技术是将含有大量随机突变的抗体可变区基因库转化成展示在噬菌体表面的抗体蛋白库。噬菌体抗体库体外筛选能避免动物免疫及杂交瘤技术中存在的人体免疫系统排斥的问题，快速高效的利用抗原从抗体库中快速准确的筛选出特异性的人源性单克隆抗体。将中草药有效成分进行修饰后用于噬菌体抗体库抗体筛选，推出高效利用中草药有效成分的可行性办法，打破中草药发展的瓶颈，对中药的现代化发展具有重要意义。
　　本研究主要内容包括：⑴探索灵芝酸A与载体蛋白牛血清蛋白（Bovine serum albumin， BSA）偶联办法，实验结果表明灵芝酸A的偶联效果最佳的方案为：以碳二亚胺法为基础，先将灵芝酸A和载体蛋白BSA分别活化，后将灵芝酸A活化反应液缓慢逐滴加入BSA溶液中，密封避光于室温下搅拌4 h，4℃层析，0.01mol/LPBS透析72h。然后将重组载体PNL6-anti-BSA ScFv转化入酵母，基于酵母表面展示技术将anti-BSA蛋白表达在酵母表面，进而将偶联在载体蛋白BSA上的人工抗原灵芝酸A结合在酵母表面，为后续的噬菌体抗体库筛选抗体做铺垫。⑵面对禽流感病毒抗体的开发存在着原核系统不能糖基化、重组病毒疫苗成本过高等问题。该部分研究是将流感病毒H7及N9蛋白表达在酵母表面，从噬菌体抗体库筛选相对应的抗体蛋白。实验结果表明，通过4轮的“吸附-洗脱-扩增”，从噬菌体抗体库中定向筛选到了特异性的抗流感病H7的噬菌体抗体，但在单克隆噬菌体ELISA试验中没有筛选到PE＋表达量的单克隆噬菌体，对于下一步的纯化噬菌体克隆中的ScFv片段的实验没有很高的利用价值。所以还需要继续进行筛选实验。

目录

声明

英文缩略表

前言

1 中草药的研究现状

2 灵芝酸A

3 中药活性小分子人工抗原合成及纯化

4 酵母表面展示技术

5 禽流感病毒（avian-human influenza virus，AIV）研究现状

6 抗体

7 噬菌体抗体库技术

8 课题研究目的与意义

第二章 灵芝酸A人工抗原的构建、鉴定、纯化及酵母表面展示人工抗原灵芝酸A

1 材料

2 方法

3 结果与分析

3 小结

第三章 噬菌体抗体库技术筛选禽流感病毒H7、N9抗体

1 材料

2 方法

3 结果与分析

4 讨论

第四章 结论

参考文献

致谢