牛多杀性巴氏杆菌B型制苗株的筛选及A、B型二价灭活疫苗的研制

摘要

多杀性巴氏杆菌（Pasteurella multocida,P.multocida）属于牛群常见机会致病菌，现以A、B型两种血清型在国内流行，致使我国养牛业遭受巨大的经济损失。A型P.multocida在牛群经长途运输、寒冷、拥挤等应激时致病，多为并发或继发感染；B型 P.multocida可诱发致死性败血症，多急性发病，病死率高。为防控牛源A、B型P.multocida在国内流行，扼制巴氏杆菌病的传播扩散，减少因其遭受的经济损失，本研究拟研制A、B型P.multocida二价灭活疫苗，并进行疫苗效力评价，为高效防控牛巴氏杆菌病奠定理论基础和实践依据。主要研究内容及结果如下：
　　1.牛A型及B型多杀性巴氏杆菌毒力评价
　　本实验室前期已筛选出A型P.multocida灭活疫苗制苗株Pm-HG，现就实验室保存的三株B型P.multocida强毒株Pm-C45、Pm-C46、Pm-C47进行毒力以及免疫原性评价。攻毒试验取168只SPF小鼠，分为4个试验组，对应腹腔攻毒Pm-C45、Pm-C46、Pm-C47、Pm-HG，每个试验组再分为5个剂量组（8只/组），另设一组为对照组。结果显示，Pm-C45、Pm-C46、Pm-C47、Pm-HG菌株的LD50分别为11.1、22.3、21.3、3.1CFU；Pm-C45菌株攻毒后病理变化严重，组织损伤评分相对较高，可知Pm-C45毒力相对较强。
　　2.牛A型及B型多杀性巴氏杆菌单价苗免疫原性的评价
　　分别研制 Pm-C45、Pm-C46、Pm-C47、Pm-HG菌株的油乳佐剂灭活疫苗。取208只SPF小鼠分为5个试验组，分别颈背部免疫接种上述4种灭活苗，一免后间隔两周二免，第5试验组为对照组不免疫，每个试验组再分为4个攻毒组（8只/组），分别腹腔感染Pm-C45、Pm-C46、Pm-C47、Pm-HG，另设一组为空白组。间接ELISA监测小鼠抗体水平，记录攻毒后两周小鼠死亡情况并进行病理学分析。结果显示， Pm-C45、Pm-C46、Pm-C47、Pm-HG灭活苗可诱导小鼠产生的最高血清抗体效价分别为1：512000、1：25600、1：3200、1：12800；Pm-C45、Pm-C46、Pm-HG灭活苗对同源菌攻毒保护率分别为56.2％、33.3%、12.5%，Pm-C47对照组攻毒未出现死亡无法统计保护率；Pm-C45、Pm-C46灭活苗对异源菌Pm-HG攻毒交叉保护率分别为25%、12.5%；免疫后小鼠同源菌攻毒病理损伤评分，Pm-C45组小鼠评分降低更多；可知Pm-C45免疫原性相对较好。
　　3.牛A、B型多杀性巴氏杆菌二价灭活疫苗的评价
　　经上述系列试验评价，证实了 Pm-HG的强毒力、高免疫原性；三株 B型P.multocida强毒株中Pm-C45的毒力最强、免疫原性最好，确定Pm-C45作为A、B型P.multocida二价灭活疫苗的B型P.multocida制苗株。更换油乳佐剂研制Pm-C45灭活苗、Pm-HG灭活苗以及二价灭活疫苗并进行评价。取45只SPF小鼠分为4个试验组颈背部免疫接种上述3种灭活苗，一免后间隔两周二免，第4试验组为不免疫对照组，每个试验组再分为2个攻毒组（5只/组），分别腹腔感染Pm-C45、Pm-HG，另设一组为空白组。间接ELISA监测小鼠抗体水平，记录攻毒后两周小鼠死亡情况并进行病理学分析。结果显示，二价灭活疫苗可诱导小鼠产生对Pm-HG和Pm-C45抗原的最高血清抗体效价分别为1：25600、1：12800；二价苗对Pm-HG、Pm-C45菌株攻毒的保护率分别为80%、100%；免疫后小鼠相比未免疫小鼠表现更大的增重、较轻的病理损伤以及更高的生存率。
　　通过牛A型及B型P.multocida毒力评价、A型及B型P.multocida单价苗的免疫原性评价，成功筛选出Pm-C45为牛A、B型P.multocida二价灭活疫苗候选菌株。经牛A、B型P.multocida二价灭活疫苗的评价，证明A、B型二价灭活苗较单价苗及未免疫对照组，能提供更好的双重保护力，以抵抗牛A、B型P.multocida的攻毒。该二价苗有望成为高效防控A、B型牛巴氏杆菌病的新型疫苗。

目录

声明

缩略语表（Abbreviation）

1 前言

1.1 研究问题的由来

1.2 文献综述

1.3 研究目的和意义

2.1 材料

2.2 方法

2.3 结果

2.4 结论

3.1 材料

3.2 方法

3.3 结果

3.4 结论

4.1 材料

4.2 方法

4.3 结果

4.4 结论

5.1 讨论

5.2小结

参考文献

致谢

附录