新型鸭呼肠孤病毒基因组序列解析及其对雏鸭致病性差异的病理学研究

摘要

本实验采用细胞培养、光镜、RT-PCR、基因扩增和测序、动物感染模型构建、组织病理学、免疫组化等多种研究方法，在BHK-21细胞系中增殖本实验室分离得到新型鸭源性呼肠孤病毒分离株(Novel Duck Reovirus，NDRV)JZ061214株、HP080421株、HP081122株、HP09318株和YM101120株，挑选其中一株NDRV HP080421株，进行全基因组测序及分析，接着对5株毒株的S1基因扩增及序列测定和分析，以及挑选这5株毒株中遗传差异较大的3株感染樱桃谷雏鸭，研究对雏鸭致病性的差异。
　　1.HP080421株全基因组测序及分析
　　得到全基因组序列(23419bp)，有10个节段，各个节段的同源性最高的均为NDRV，与NDRV SD-12株和091株的亲缘关系最近。
　　2.5株NDRV的S1基因扩增及序列测定和分析
　　扩增出了约1586bp的节段，5株毒株S1基因的核苷酸序列与NDRV的同源性均在90％以上，而5株DRV与MDRV和ARV同源性分别为35.0％-37.4％和43.2％-45.3％。分析S1基因的进化树，JZ061214株与NDRV SD-12株亲缘关系最近，与HP09318株，HP081122株，HP080421株和YM101120存在一定的遗传距离。
　　3.3株NDRV对樱桃谷雏鸭致病性差异研究
　　NDRV JZ061214株、HP09318株和YM101120株感染7d樱桃谷鸭，部分鸭眼角出现泪痕，剖检病变类似，表现为脾肿大，脾表面可见大小不一的黄白色病灶;JZ061214组病变最为严重，YM101120组感染后5d和7d，黄、白斑点消失。组织病理学观察，脾表现为出现不同程度的细胞坏死;法氏囊病变表现为淋巴滤泡和淋巴滤泡内的淋巴细胞减少;胸腺表现为胸腺小体周围出现坏死灶。用免疫组织化学检测感染后组织中病毒含量，发现在感染后3d和5d，脾的病毒滴度最高，3株毒株的脾中病毒含量最高的是JZ061214株，剩余两种病毒含量接近。

目录

声明

摘要

缩略语表

本研究所用呼肠孤病毒参考毒株序列

前言

引言

1 新型鸭呼肠孤病毒病研究现状

2 新型鸭呼肠孤病毒病原学概述

2．1 新型鸭呼肠孤病毒的理化与形态学特征

2．2 新型鸭呼肠孤病毒的基因组及其编码的蛋白

2．3 新型鸭呼肠孤病毒与其他禽呼肠孤病毒的遗传进化关系

2．4 新型鸭呼肠孤病毒的分子生物学特性

3 新型鸭呼肠孤病毒的致病性

3．1 流行病学

3．2 临床表征

3．3 病理学变化

4 新型鸭呼肠孤病毒病的诊断

5 新型鸭呼肠孤病毒病的发病机制和防治方法

研究目的及意义

1．1 病毒、细胞、动物及参考序列

1．2 主要试剂

1．3 主要仪器

1．4 主要溶液及其配制

2 试验方法

2．1 新型鸭呼肠孤病毒JZ061214株、HP09318株、YMl01120株、HP080421株和HP081122株的增殖及RNA的提取

2．2 新型鸭呼肠孤病毒HP080421株全基因的测序

2．3 5株新型鸭呼肠孤病毒S1基因以及HP08421基因全序列的序列拼接及分析

2．4 新型鸭呼肠孤病毒HP09318株、JZ061214株、YM101120株对雏鸭的致病性比较

2．5 统计学分析

试验结果

1 新型鸭呼肠孤病毒HP080421基因组序列测定及解析

1．1 HP080421株全基因结构分析

1．2 HP080421株基因组各个节段同源性分析

1．3 HP080421株全基因组各个节段进化分析

2 新型鸭呼肠孤病毒JZ061214株、HP09318株、HP080421株、HP081122株和YMl01120株S1基因的扩增结果及序列分析

2．1 S1基因的扩增

2．2 S1基因序列的分析

3 新型鸭呼肠孤病毒JZ061214株、HP09318株和YM101120株对雏鸭的致病性

3．1 临床症状和眼观病理变化

3．2 组织病理变化观察结果

3．3 免疫组织化学方法检测感染鸭的脾中病毒含量

讨论

1 新型鸭呼肠孤病毒HP080421株全基因组序列测定及分析

2 新型鸭呼肠孤病毒JZ061214株、HP09318株、HP080421株、HP081122株和YMl01120株S1基因的分析

3 新型鸭呼肠孤病毒JZ061214株、HP09318株和YMl01120株对雏鸭致病性观测结果

结论

参考文献

致谢