声明
摘要
缩略词表
第一章前言
1．1课题的提出
1．2国内外研究进展
1．2．1盐胁迫对植物的伤害机制
1．2．2植物对盐胁迫的耐受机制
1．2．3嫁接提高植物耐盐机制
1．2．4植物Na+转运及相关基因功能
1．2．5 HKT蛋白是限制Na+向地上部运输的关键基因
1．2．6 CRISPR／Cas9系统在瓜类作物上的应用
1．2．7 microRNA与盐胁迫
1．2．8植物microRNA的长距离移动
1．3本研究的目的意义和内容
1．3．1目的和意义
1．3．2研究内容
第二章南瓜砧木在黄瓜嫁接苗耐盐过程中的关键作用
2．1材料和方法
2．1．1实验材料
2．1．2嫁接苗培养和NaCl处理
2．1．3 Na+，K+含量测定
2．1．4统计分析
2．2结果与分析
2．2．1 NaCl处理下嫁接苗不同组织中Na+的含量
2．2．2 NaCl处理下嫁接苗Na+的积累过程
2．3讨论
2．3．1耐盐南瓜砧木是限制Na+向接穗运输的关键
2．3．2黄瓜嫁接苗在耐盐过程中存在砧穗互作
2．4小结
第三章南瓜CmHTK1；1在嫁接黄瓜耐盐过程中的功能分析
3．1材料和方法
3．1．1实验材料
3．1．2常用培养基和营养液的配制
3．1．3嫁接苗培养和NaCl处理
3．1．4植株形态及生理参数测定
3．1．5 Na+，K+含量测定
3．1．6南瓜HKT基因的克隆及表达分析
3．1．7进化树构建
3．1．8亚细胞定位
3．1．9原位杂交
3．1．10 CmHKT1；1在酵母中的异源功能验证
3．1．11超表达载体构建及黄瓜的遗传转化
3．1．12拟南芥转化和筛选
3．1．13 Na+的染色观测
3．1．14统计分析
3．2结果与分析
3．2．1南瓜HKT基因的鉴定
3．2．2盐胁迫下CmHKT1；1的表达分析
3．2．3 CmHKT1；1的表达定位分析
3．2．4 CmHKT1；1的离子转运特性鉴定
3．2．5盐胁迫下CmHKT1；1的生物学功能分析
3．3讨论
3．3．2超表达CmHT1；1增强黄瓜耐盐性
3．3．3 CmHKT1；1通过砧木限制Na+向接穗运输
3．4小结
第四章根部HKT基因编辑对南瓜耐盐性的影响
4．1材料和方法
4．1．1实验材料
4．1．2 CRISPR／Cas9表达载体构建
4．1．3发根农杆菌的转化
4．1．4发根农杆菌介导的南瓜根部转化
4．1．5基因编辑效率检测
4．1．6 NaCl处理和取样
4．1．7 Na+、K+含量测定
4．1．8统计分析
4．2结果和分析
4．2．1设计CmHKT1；1的sgRNA
4．2．2发根农杆菌介导的南瓜根部转化过程
4．2．3 CmHKT1；1编辑效率检测
4．2．4南瓜根部CmHKT1；1基因编辑后对地上部Na+影响
4．3讨论
4．3．1发根农杆菌可用于基因功能的研究
4．3．2 CnmKT1；1限制了Na+向地上部运输
4．4小结
第五章miRNA在黄瓜嫁接苗耐盐性中鉴定及作用机制
5．1材料和方法
5．1．1实验材料
5．1．2材料处理和取样
5．1．3 Small RNA文库的构建和测序
5．1．4测序数据的处理分析
5．1．5 microRNA的鉴定和差异表达分析
5．1．6 microRNA靶基因预测
5．1．7 Go分析及KEGG分析
5．1．8 microRNA的实时荧光定量
5．2结果与分析
5．2．1 small RNA序列的基本统计
5．2．2 microRNA的鉴定
5．2．3黄瓜、南瓜中共有的microRNA鉴定
5．2．4嫁接苗中可能长距离转运的miRNA鉴定
5．2．5嫁接苗中响应盐胁迫的差异表达miRNA鉴定
5．2．6黄瓜／南瓜嫁接苗响应盐胁迫的miRNA靶基因的预测
5．2．7黄瓜嫁接苗差异miRNA靶基因功能富集分析
5．2．8黄瓜嫁接苗差异miRNA靶基因KEGG分析
5．2．9盐胁迫下黄瓜嫁接苗miRNA参与的激素调控网络
5．3讨论
5．3．1 miRNA参与黄瓜嫁接苗耐盐过程
5．3．2利用高通量测序鉴定miRNA长距离移动的探讨
5．4小结
6．1结论
6．2展望
参考文献
附录
致谢
