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桃ERFs和PpIAA1协同调控桃成熟软化的分子机制研究

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摘要

缩略词表

第一章文献综述

1.桃果实成熟软化研究进展

1.1桃果实肉质分类

1.2植物激素与果实成熟软化

1.3细胞壁多糖与果实成熟软化

1.4桃果实不同肉质形成机理

2.植物体内激素代谢的相关研究

2.1乙烯的合成和信号转导

2.2生长素的合成与信号转导

2.3生长素与乙烯之间的交互作用

3.本研究的意义、内容与技术路线

3.1本研究的意义

3.2本研究的内容

第二章果实成熟相关ERFs的筛选

1.引言

2.材料和方法

2.1实验材料

2.2桃果实的采后处理

2.3乙烯释放量和果实硬度测定

2.5转录组文库建立

2.6 ERFs基因结构分析

2.7候选ERFs进化分析

3.结果与分析

3.1 ERFs的进化分析

3.2 ERFs基因结构分析

3.3 ‘CN13’采后1-MCP处理后的乙烯和硬度变化

3.4 ERFs的表达模式热图分析

3.5 ERFs基因的表达模式

4.讨论

第三章ERFs基因参与果实成熟机理研究

1.引言

2.材料与方法

2.1实验材料

2.2桃果实的采后处理

2.3 DNA、RNA的提取及定量

2.4候选基因启动子克隆及元件分析

2.5脱落酸提取

2.6亚细胞定位

2.7酵母单杂交

2.8双荧光素酶实验

2.9 GUS实验

2.10瞬时侵染桃果肉

2.11凝胶滞留实验(EMSA)

3.结果与分析

3.1桃ERF基因表达模式分析

3.2桃ERF与其他ERF蛋白氨基酸比对及进化分析

3.3启动子激素相应元件分析

3.4乙烯促进启动子NCED活性

3.5 PpERF2、PpERF3和PpERF4定位在细胞核

3.6桃PpERF2、PpERF3结合PpNCED2、PpNCED3、PpPG1基因

3.7凝胶滞留实验

3.8桃PpERF2为转录抑制子,PpERF3为转录激活子

3.9桃PpERF4结合PpACO1、PpNCED2、PpNCED3和PpPG1基因

3.10桃PpERF4促进基因成熟相关基因的表达

4.讨论

第四章AUX/IAA基因参与桃果实成熟机理研究

1.引言

2.材料与方法

2.1实验材料

2.2果实的处理与取样方法

2.3 DNA、RNA的提取及定量

2.4生物信息学分析桃AUX/IAA基因及系统进化树构建

2.5候选基因启动子元件分析

2.6亚细胞定位

2.7酵母单杂交

2.8双荧光素酶实验

2.9瞬时侵染桃果肉

2.10凝胶滞留实验(EMSA)

2.11酵母双杂交

2.13载体构建和番茄转化

2.14番茄采后实验

3.结果与分析

3.1桃IAA1基因特性分析

3.2桃IAA1与其他植物IAA1氨基酸比对及进化分析

3.3候选启动子激素元件分析

3.4桃PpIAA1基因结合并激活基因PpNCED、PpG1、PpACS1的表达

3.5 PpIAA1与PpERF4互作共同调控果实成熟

3.6 PpERF4增强基因PpIAA1的转录活性

3.7 PpIAA1转基因阳性苗鉴定

3.8 PpIAA1对番茄植株的影响

3.9 PpIAA1对番茄果实发育的影响

3.10 PpIAA1对番茄果实采后的影响

4.讨论

第五章全文结论

1.桃果实成熟相关ERFs筛选

2.ERF可直接结合在成熟相关基因的启动子上并调控其表达

3.桃AUX/IAA基因调控乙烯合成基因和成熟相关基因的表达

参考文献

附录

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致谢

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