声明
摘要
缩略名词表
1前言
1．1研究问题的由来
1．2文献综述
1．2．1 bZIP转录因子家族研究进展
1．2．2植物bZIP转录因子B亚家族成员研究进展
1．2．3植物bZIP家族B亚家族成员结合的顺式元件研究进展
1．3本研究的目的和意义
2材料与方法
2．1实验材料
2．1．1水稻材料和来源
2．1．2烟草材料
2．1．3酵母双杂交文库
2．2菌株和载体
2．3载体构建及遗传转化
2．3．1载体的构建
2．3．2农杆菌介导的水稻愈伤遗传转化
2．3．3农杆菌介导的烟草叶片遗传转化
2．4植物基因组DNA的提取和转基因阳性材料的检测
2．5总RNA的提取、反转录和实时定量PCR
2．6 RNA-Seq以及分析
2．7植物总蛋白的提取及Western Blot
2．8蛋白原核表达及纯化
2．9水稻原生质体中的亚细胞定位
2．10蛋白质与DNA结合分析
2．10．3凝胶阻滞实验(EMSA)
2．11蛋白相互作用分析
2．11．1酵母双杂交及酵母筛库
2．11．2双分子荧光互补(BiFC)
2．11．3 Pull down
2．11．4 Immunoprecipitation(IP)
2．12水稻原生质体双荧光素酶系统分析转录因子激活活性
3结果与分析
3．1．1 OsbZIP81生物信息学分析
3．1．2 OsbZIP81及其同源蛋白的进化关系分析
3．1．3 OsbZIP81三个转录本编码蛋白转录激活和自激活活性分析
3．1．4 OsbZIP81．1、OsbZIP8 1．2和OsbZIP81．3的亚细胞定位分析
3．1．5 OsbZIP81．1和OsbZIP81．2的时空表达模式
3．1．6 OsbZIP81．1和OsbZIP81．2可以形成同源或异源二聚体
3．1．7 OsbZIP81．1和OsbZIP81．2受生物和非生物胁迫的诱导
3．1．8在酵母中OsbZIP81．2能够与不同类型的毒力蛋白VirE2互作
3．1．9 OsbZIP81的bZIP结构域是潜在的VirE2互作区域
3．1．10 OsbZIP81．1和OsbZIP81．2超表达转基因水稻材料的鉴定
3．1．11 OsbZIP81突变体的鉴定
3．2 OsbZIP81．1和OsbZIP81．2靶基因的鉴定
3．2．1 ChIP-Seq检测OsbZIP81．1全基因组范围内结合的基因
3．2．2 OsbZIP81．1结合的顺式作用元件的鉴定
3．2．3 ChIP-qPCR验证ChIP-Seq结果
3．2．4 RNA-Seq检测OsbZIP81．1和OsbZIP81．2调控的基因
3．2．5 OsbZIP81．1和OsbZIP81．2差异表达基因GO和KEGG富集分析
3．2．6 OsbZIP81．1靶基因的分析
3．2．7 OsbZIP81．1靶基因的GO和KEGG富集分析
3．2．8 OsbZIP81．1可能通过直接结合并调控荣莉酸合成路径上的基因从而调控茉莉酸的合成
3．2．9 OsbZIP81．1和OsbZIP81．2转基因烟草材料的构建
3．3 OsbZIP81．1和OsbZIP81．2互作蛋白的筛选
3．3．1 OsbZIP81．2互作蛋白的酵母文库筛选
3．3．2 OsbZIP81．1和OsbZIP81．2互作蛋白的筛选和质谱鉴定
3．3．3 OsbZIP81．1和OsbZIP81．2与Y2H和IP-MS中部分基因的互作关系验证
3．4 OsbZIP84生物学功能分析
3．4．1 OsbZIP84的生物信息学分析
3．4．2 OsbZIP84时空表达模式和亚细胞定位研究
3．4．3 OsbZIP84超表达和基因敲除材料的构建和鉴定
3．4．4 OsbZIP84超表达和RNAi转基因植株表型分析
3．4．5 OsbZIP84受赤霉素和赤霉素抑制剂的抑制或诱导
3．4．6 OsbZIP84超表达植株和RNAi植株中GA合成路径和信号反馈路径部分基因表达量检测
3．4．7 OsbZIP84 CRISPR／Cas9转基因敲除植株的构建
3．4．7 OsbZIP84转录因子顺式元件的鉴定
4讨论
4．1 OsbZIP81是一个可变剪接基因
4．2 OsbZIP81．2可能在农杆菌介导的水稻遗传转化中扮演了重要角色
4．3 OsbZIP81可能在水稻应对生物和非生物胁迫扮演了重要角色
4．4 OVRE是一个新的水稻bZIP类转录因子顺式作用元件
4．5 OsbZIP81可能通过茉莉酸途径调控水稻的抗病反应
4．6 OsbZIP84可能通过赤霉素影响水稻的生长发育
4．7 B-bZIP亚家族成员在功能上可能有冗余
4．8后续工作设想
参考文献
附录
致谢
