SEN病毒检测方法和致病性研究

摘要

【目的】建立SENV的聚合酶链反应(PCR)、斑点杂交和抗原抗体检测方法,在此基础上检测SENV-D和SENV-H在武汉地区各种不同人群中的流行情况,结合临床资料,进一步验证SENV的传播途径,初步分析SENV的致病性及重叠感染时对拉米夫定抗HBV疗效的影响,以探讨SENV感染与病毒性肝炎之间的关系.【方法】针对SENV ORF1部分区域设计、合成引物,采用套式聚合酶链反应(nested-PCR)扩增SENV-D和SENV-H亚型.扩增SENV-D ORF2基因,克隆至相应的质粒中,以地高辛DNA标记试剂盒制备SENV ORF2探针,并进行斑点杂交检测.比较针对SENV ORF2和ORF1不同区域设计引物的PCR方法和斑点杂交方法在SENV检测方面的差异.对采用SENV ORF1引物、SENV ORF2引物扩增的阳性产物测序和Blastn序列比对,用clutal X和mega2软件分析SENV的系统进化情况.转化携带SENV ORF2基因的重组原核表达载体至BDPS菌中,以IPTG诱导表达后进行SDS-PAGE,用混合血清对上述表达蛋白进行免疫印迹分析.【结论】SENV ORF1套式引物适用于对SENV感染率的PCR检测,不同引物扩增和不同模板提取方法可能是影响SENV DNA检出率重要因素;以地高辛标记的探针具有SENV-D特异性,斑点杂交检测SENV感染阳性率低于PCR,而特异性较好;SENV ORF2原核表达蛋白具有一定的抗原活性,可用于SENV IgG的检测.武汉地区存在SENV的感染,血浆置换和静脉吸毒是SENV重要的传播方式.SENV可能不是非甲~非戊肝炎的主要病原体,慢性乙型肝炎合并SENV感染亦不是病情加重的主要原因,而治疗过程中重叠SENV感染可能会使HBV DNA对拉米夫定的应答率下降.

目录

前言

第一部分：SENV DNA聚合酶链反应和斑点杂交检测方法的建立

材料与方法

结 果

讨论

参考文献

第二部分：SENV部分基因系统进化分析和原核表达蛋白抗原性分析

材料与方法

结 果

讨论

参考文献

第三部分：SENV武汉地区分子流行病学调查和致病性分析

材料与方法

结 果

讨论

参考文献

结论

英文缩略词表

综述 新病毒和肝炎

附录

致谢