脂肪酸合成酶（FASE）及其抑制剂在胃腺癌中的作用

摘要

前言:脂肪酸合成酶(fattyacidsynthase，FASE)是脂肪酸生物合成过程中将小分子碳单位聚合成长链内源性脂肪酸的关键酶。在正常情况下仅表达于肝脏、脂肪组织和泌乳期乳腺等组织中，但大量的研究发现在许多肿瘤组织和细胞中如乳腺癌、前列腺癌、子宫内膜癌、结肠癌、卵巢癌等都存在脂肪酸合成酶(FASE)的过度表达，且FASE的过度表达与肿瘤的转移、侵袭以及诊断和预后密切相关。同时研究发现：脂肪酸合成酶抑制剂浅蓝菌素(Cerulenin)可以特异性的抑制FASE的活性，不可逆抑制内源性脂肪酸的合成，从而抑制肿瘤细胞的增殖，并诱导肿瘤细胞凋亡的发生。目前关于脂肪酸合成酶及其抑制剂在消化道肿瘤方面的研究较少，因此本课题主要旨在FASE在胃癌组织和细胞中表达情况以及FASE抑制剂Cerulenin对于胃癌细胞的细胞毒性等诸多方面开展了如下四个部分的研究： 第一部分:三种胃腺癌细胞系中脂肪酸合成酶的表达及其意义 目的：研究三种不同分化的胃癌细胞中脂肪酸合成酶(FASE)的表达情况及其可能的临床意义。 方法：用RT-PCR和Westernblot技术检测三种不同分化程度的人胃腺癌细胞系(MKN45、SGC7901和MKN28)中FASE的mRNA和蛋白的表达水平，并分析其与三种不同分化胃癌细胞的关系。 结果：三种不同分化程度的人胃腺癌细胞系MKN45、SGC7901和MKN28均可见FASE的mRNA和蛋白的表达；相对于低分化MKN45，以高、中分化的MKN28和SGC7901表达量较高(p＜0.05)。 结论：FASE高表达于胃癌细胞中，尤其主要发生在胃癌的早期阶段，与胃癌的分化程度密切相关。 第二部分:胃腺癌组织中FASE和相关蛋白的表达及其意义 目的：检测胃癌中脂肪酸合成酶(FASE)和E-钙黏素(E-cadherin)的表达，并探讨其在胃癌发生发展中的作用。 方法：采用免疫组织化学S-P技术，对胃癌及癌旁正常组织各121例手术标本中FASE、E-钙黏素的表达进行检测，并分析两种蛋白与临床病理特征之间的关系。 结果：FASE在癌旁组织中的阳性表达率(11.3％)明显低于胃癌组织(72.6％，P＜0.01)，而E-钙黏素在癌旁组织的阳性表达率(93.6％)则明显高于胃癌组织(43.3％，P＜0.01)。FASE表达与患者年龄、性别、Lauren's分类和分化程度相关(P＜0.05)，与肿瘤大小、Borrmann's分类、侵袭深度、转移情况、TNM分期及生长方式无关(P＞0.05)；FASE阳性和阴性患者的生存率虽有不同但无显著性差异(P=0.349)。E-钙黏素表达与转移情况、分化程度、Lauren's分类相关(P＜0.05)；与性别、年龄、肿瘤大小、Borrmann's分类、侵袭深度及TNM分期等均无关(P＞0.05)。胃癌组织中E-钙黏素表达缺失与FASE高表达呈正相关(P＜0.05)。 结论：FASE高表达与E-钙黏素表达缺失均与胃癌分化程度相关，两者联合检测有可能作为评估胃癌恶性程度的生物学指标，为临床诊断及治疗该病提供重要依据。 第三部分:脂肪酸合成酶抑制剂抑制人胃癌细胞增殖并诱导凋亡 目的：研究脂肪酸合成酶(FASE)抑制剂浅蓝菌素(cerulenin)对人胃癌细胞株增殖的影响及诱导凋亡的作用。 方法：MTF法观察终浓度2.5，5，10，20和40mg/Lcerulenin分别作用于无血清培养及有血清培养的MKN28，SGC7901和MKN45细胞株24h后，检测其对细胞增殖的抑制作用。40mg/Lcerulenin作用于无血清培养的三种细胞12h后，用流式细胞仪(FCM)、DNA凝胶电泳对其凋亡和细胞周期进行检测。 结果：Cerulenin对人MKN28，SGC7901，MKN45细胞株的增殖有显著的抑制作用并呈剂量依赖性，对无血清组的培养细胞株的抑制作用高于有血清组。 结论：Cerulenin显著地阻遏人胃癌细胞的增殖并诱导人胃癌细胞凋亡，有可能成为胃癌治疗的新靶点。 第四部分:线粒体凋亡通路在FASE抑制剂诱导胃癌细胞凋亡中的作用 目的：研究Caspase-3和Caspase-9在FASE抑制剂Cerulenin诱导的胃癌细胞凋亡过程中的作用，与内源性线粒体凋亡通路的关系。 方法：以40mg/Lcerulenin分别作用于加caspase-3抑制剂、caspase-9抑制剂、联合Caspase-3和Caspase-9抑制剂以及未加caspases抑制剂培养的MKN45细胞，培养24小时后，用流式细胞仪分别检测细胞凋亡率。 结果：相对于对照组(凋亡率为3.05％)，Cerulenin组可以显著诱导MKN45细胞的凋亡(凋亡率为35.39％，P＜0.01)；而Caspase-3抑制剂和Caspase-9抑制剂均可明显抑制cerulenin诱导MKN45细胞的凋亡，凋亡率分别为22.16％、29.36％。特别是在联合应用Caspase-3和Caspase-9抑制剂后，可极大地抑制cerulenin诱导的细胞凋亡(凋亡率为13.69％，P＜0.05)。 结论：FASE抑制剂cerulenin可诱导MKN45细胞凋亡，凋亡途径与Caspase-3和Caspase-9有关，可能通过启动内源性线粒体凋亡途径实现的。

目录

英语摘要

前言

第一部分.三种胃腺癌细胞系中脂肪酸合成酶的表达及其意义

第二部分胃腺癌组织中FASE和相关蛋白的表达及其意义

第三部分脂肪酸合成酶抑制剂抑制人胃癌细胞增殖并诱导凋亡

第四部分线粒体凋亡通路在FASE抑制剂诱导胃癌细胞凋亡中的作用

全文总结

参考文献

综述脂肪酸合成酶与消化肿瘤

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致谢