丝裂素活化蛋白激酶级联途径在肝脏缺血再灌注损伤和缺血预处理中作用的研究

摘要

第一部分动物模型的建立及缺血预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤保护作用的研究 目的：建立大鼠肝脏缺血再灌注和缺血预处理模型，观察缺血预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤的影响，为以后的研究提供基础。 方法：采用大鼠肝原位部分缺血再灌注模型，120只Wistar大鼠随机分为缺血再灌注组(IR)，缺血预处理组(IP)与假手术组(SO组)，IP、IR组分别于复流0、0.5、1、2、4、8、12、24h时取材，应用生化分析仪检测各组血清谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的变化，并观察肝组织病理改变。 结果：(1)在缺血再灌注组与缺血预处理组，随着缺血后再灌注时间的延长，大鼠血清ALT、AST明显升高。约在4小时时达最高峰，而后渐下降。 (2)给予缺血预处理后，与单纯缺血再灌注组比较，复灌后血清ALT、AST明显下降，在0.5h～8h组差异显著。(复灌后4小时ALT为1263±156.38u/Lvs945.00±104.38u/L，P＜0.05；AST为2386.67±360.29u/Lvs1563.40±253.01u/L，P＜0.05)。 (3)病理检查见光镜下缺血再灌注组随着再灌注时间的延长，肝细胞坏死加剧，炎症细胞浸润更明显。与缺血再灌注组相比，缺血预处理组的肝细胞坏死范围变小，损伤减轻。 结论：缺血预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤具有保护作用。 第二部分大鼠肝脏缺血再灌注和缺血预处理后MAPK级联通路表达变化的研究 目的：观察肝缺血再灌注和缺血预处理后MAPK级联通路中各种亚类(p38MAPK、JNK和ERK)活化的情况，以探讨其在肝脏缺血再灌注损伤和缺血预处理保护中的作用。 方法：120只Wistar大鼠随机分成缺血再灌注组(IR)，缺血预处理组(IP)与假手术组(SO组)，利用肝原位部分缺血再灌注模型，于复灌后0、0.5、1、2、4、8、12、24小取材，应用免疫组织化学的方法对磷酸化的p-P38、p-JNK和p-ERK进行免疫组化检测并作半定量分析，观察其在缺血再灌注损伤和缺血预处理中的变化。 结果：(1)p-ERK在缺血后即有轻度地增高，但在再灌注后30min开始增高明显，持续到再灌注后4小时，高峰出现在再灌注后2小时。与IR组相比，IP组p-ERK的表达在再灌注后1小时、2小时和4小时较IR组增高(p＜0.05)。 (2)p-JNK在缺血后即有轻度地增高，但在再灌注后30min开始增高明显，持续到再灌注后4小时，高峰出现在再灌注后2小时。与IR组相比，IP组p-JNK的表达在再灌注后1小时、2小时和4小时较IR组降低(p＜0.05)。 (3)p-P38在缺血后即有轻度地增高，但在再灌注后30min开始增高明显，高峰出现在再灌注后1小时，2小时后开始下降，表达程度维持在缺血后水平。与IR组相比，IP组p-P38的表达较IR组高，但仅在再灌注后1小时明显增高(p＜0.05)。 结论：缺血预处理可通过增高ERK和P38的磷酸化水平，降低JNK的磷酸化水平减轻缺血再灌注导致的肝脏损伤，MAPKs通路可能在缺血再灌注损伤和缺血预处理的保护作用中取至关重要的作用。 第三部分缺血预处理和缺血再灌注对大鼠肝脏即早基因c-fos和c-jun表达变化的影响 目的：观察大鼠肝脏缺血再灌注和缺血预处理对即早基因c-fos、c-jun表达的影响。 方法：采用大鼠原位部分缺血再灌注模型，120只Wistar大鼠随机分为缺血再灌注组(IR)，缺血预处理组(IP)和假手术组(SO)，每组又分为8个亚组(n=6)，于复灌后0h、0.5h、1h、2h、4h、8h、12h、24h取材，应用RT-PCR法检测各组c-fos、c-junmRNA的表达。 结果：(1)在IR组再灌注后0.5小时～2小时c-fos和c-jun的表达均增高，1小时达高峰；4小时后只有c-jun有持续较高的表达，c-fos的表达开始下降； (2)IP组c-fos和c-junmRNA的表达较IR组低； (3)与IR组相比，IP组c-junmRNA在0.5h、1h和2h组明显降低(p＜0.05)。 结论：缺血预处理能有效地保护肝脏免受缺血再灌注造成的损伤，这种保护效应的机制可能与影响即早基因的转录有关。 第四部分大鼠肝缺血再灌注损伤和缺血预处理对细胞凋亡、增殖的影响 目的：观察肝缺血再灌注和缺血预后处理对肝细胞增殖、凋亡的影响，以探讨二种背景下的细胞周期变化。 方法：120只Wistar大鼠随机分成缺血再灌注组(IR)，缺血预处理组(IP)与假手术组(SO组)，利用肝原位部分缺血再灌注模型，于复灌后0、0.5、1、2、4、8、12、24小取材，应用流式细胞仪，以Ki-67抗原的检测和Sub-G1法分别为细胞增殖与细胞凋亡(Ap指数)的定量分析方法，观察缺血再灌注损伤变化以及缺血预处理对这一过程的影响。 结果：(1)在IP组，Ki-67相对表达率在复灌后有两个峰值，分别于复灌后的1、12小时出现，而IR组在复灌后只有一个峰值，于复灌后24小时出现。复灌后，IP各组均有明显增高，而IR于复灌后2小时才有增高； (2)在IP组，复灌后肝细胞凋亡率也有两个峰，分别于复灌后的0、4小时，而IR组在复灌后肝细胞凋亡率逐渐增高，峰值于复灌后12小时出现； (3)IP与IR组相比，Ki-67在复灌后的0、1、24小时差别有意义；Ap在复灌后的1小时以上差别有意义。 结论：缺血预处理可减轻缺血再灌注损伤后的肝细胞凋亡，并在复灌早期有细胞增殖现象，可能是其对缺血再灌注损伤起到保护作用的机制之一。

目录

英文缩写

前 言

第一部分：动物模型的建立及缺血预处理对大鼠肝缺血再灌注损伤保护作用的研究

材料与方法

结果

讨论

图

参考文献

第二部分：大鼠肝脏缺血再灌注和缺血预处理后MAPK级联通路表达变化的研究

材料与方法

结果

1、各实验组细胞p-ERK表达的变化

2、各实验组细胞p-JNK表达的变化

3、各实验组细胞p-P38表达的变化

讨论

参考文献

第三部分：缺血预处理和缺血再灌注对大鼠肝脏即早基因c-fos和c-jun表达变化的研究

材料与方法

结果

讨论

参考文献

第四部分：大鼠肝缺血再灌注和缺血预处理对细胞凋亡、增殖的影响

材料与方法

结果

讨论

参考文献

综 述：PAPK途径在肝缺血再灌注损伤和缺血预处理中的作用

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