肿瘤细胞叶酸受体的表达及其靶向siRNA干扰研究

摘要

目的：检测肿瘤细胞株叶酸受体的表达，以此作为肿瘤靶标，以GFP和luciferase作为报告基因，探讨其靶向肿瘤细胞siRNA的干扰效应。
　　 方法
　　 1.以FITC标记的folate-pRNA作为检测分子，采用流式细胞术和倒置荧光显微术，检测肿瘤细胞株叶酸受体的表达；
　　 2.通过脂质体技术共转染pGL3-control，pRL-TK和pRNA/siRNA（luciferase），研究其对萤光素酶的干扰效应，并以pRNA/siRNA（GFP）设为对照组；
　　 3.通过脂质体技术共转染pEGFP-N2和pRNA/siRNA（GFP），研究其对GFP的干扰效应，并以pRNA/siRNA（luciferase）设为对照组；
　　 4.体外将folate-pRNA与pRNA/siRNA（luciferase）混合形成纳米颗粒，与细胞共孵育，通过双萤光素酶报告检测系统测定萤光素酶的活性。
　　 结果
　　 1.FCM检测结果表明，25种肿瘤细胞株中，01和02细胞株表面高表达叶酸受体；
　　 2.报告基因载体与siRNA载体共转染实验表明，转染pRNA/siRNA（lueiferase）可明显降低萤光素酶的活性，对GFP表达无影响；而转染pRNA/siRNA（GFP）可显著抑制转染细胞GFP的表达，对luciferase的表达无明显影响；表明siRNA干扰具有特异性；
　　 3.通过folate-pRNA与pRNA/siRNA（luciferase）形成的纳米颗粒能直接进入细胞，靶向胞内的siRNA可发挥特异性干扰效应。
　　 结论通过脂质体转染siRNA可特异性干扰胞内基因的表达，某些肿瘤细胞可高表达叶酸受体，以此作为肿瘤特异性靶标，以其pRNA为靶向分子，靶向的pRNA/siRNA能诱导特异性干扰报告基因的表达效应，为其靶向基因治疗研究奠定了基础。

目录

文摘

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前 言

材 料

实验方 法

结 果

讨 论

小 结

参考文献

攻读学位期间撰写与参与发表的论文

综 述

参考文献

致 谢