抗原肽/HLA-A2复合物诱导和调节同种反应性T细胞的应答

摘要

T 细胞TCR识别的配体是抗原肽/MHC复合物(pMHC)，MHC型别不同的供/受者间进行移植后会发生强烈的排斥反应，其机制主要是同种反应性T细胞(简称同种T细胞)识别同种异体组织抗原(简称同种抗原)并产生应答。关于同种T细胞直接识别的可能模式，以及同种T细胞是否具有pMHC特异性，一直存在争论。本论文拟从单个pMHC(即T细胞识别的抗原表位)角度分析，通过诱导单一pMHC特异性同种T细胞，证实同种T细胞的识别也具有pMHC特异性，并利用同种T细胞识别的特异性探索打破耐受或诱导耐受的方法。论文共分为三部分，其主要内容与结果如下：
　　 一、同种T细胞对抗原的识别具有pMHC特异性
　　 为了研究同种T细胞是否存在对pMHC的特异性，本研究选择Tyr/HLA-A2作为pMHC的代表，利用仅表达HLA-A2、TAP缺陷的T2细胞作为刺激细胞，提呈Tyr/HLA-A2，通过与HLA-A2阴性个体(HLA-A2-ve)的PBLs进行长期混合淋巴细胞培养(LTMLC)，诱生Tyr/HLA-A2特异性的同种T细胞，用特异性细胞毒试验和pMHC四聚体染色检测经过LTMLC诱生的同种T细胞。结果显示结合于同种HLA分子上的自身抗原肽与结合于自身HLA分子上的病毒肽一样，可在体外有效的诱导产生特异性的T细胞，显示同种T细胞对抗原的识别亦具有pMHC特异性。
　　 二、pMHC二聚体加载到HLA-A2-ve单核细胞表面诱导单表位特异性的同种T细胞
　　 细胞表面存在种类繁多的pMHC，导致传统实验手段制备的同种T细胞为针对众多pMHC的多克隆T细胞的集合，过继该多克隆T细胞难以避免发生同种T细胞造成的移植物抗宿主反应。本研究利用pMHC二聚体分子中的Fc段与单核细胞的FcR结合，将单一pMHC(Tyr/HLA-A2)加载到HLA-A2-ve个体单核细胞表面，诱导PBLs产生针对该表位的同种T细胞。结果显示短期混合培养体系中，加载Tyr/HLA-A2的HLA-A2-ve单核细胞可刺激自体来源的PBLs明显增殖，并诱导产生针对该表位的同种T细胞，这种经过短期体外扩增的特异性同种反应性T细胞具有更好的细胞活力与功能，有望过继应用打破病理性耐受。
　　 三、可溶性pMHC二聚体特异性抑制同种T细胞应答
　　 在移植免疫研究中，诱导移植物特异性的外周耐受是尚未实现的目标。本研究通过建立HLA-A2-ve PBLs与T2/Tyr混合培养的同种反应体系，研究可溶性抗原肽/HLA-A2二聚体对同种T细胞应答的调节作用。结果显示，Tyr/HLA-A2二聚体特异性抑制HLA-A2-ve PBLs被T2/Tyr刺激后的增殖效应，并特异性抑制同种杀伤性T细胞的功能。Tyr/HLA-A2特异性T细胞频率检测结果提示，Tyr/HLA-A2二聚体可抑制Tyr/HLA-A2特异性同种T细胞的产生或诱导其无能，从而抑制同种反应，为诱导移植受者对移植物特异性免疫耐受提供了新的手段。
　　
　　 本研究的创新点和意义:
　　 1．本研究从单个表位角度证明了长期混合淋巴细胞培养(LTMLC)方法能够诱生pMHC特异性的同种T细胞，同种反应性T细胞与普通抗原反应性T细胞一样具有pMHC特异性。为同种T细胞直接识别机制提供了直接的实验依据，也为后续研究提供了理论基础。
　　 2．本研究利用HLA-A2二聚体，将单一pMHC加载到HLA-A2-ve个体的单核细胞表面，能够有效诱导该个体来源的PBLs产生针对单一pMHC的同种T细胞，为制备单一pMHC特异性的同种T细胞、及其过继治疗提供了可能。
　　 3．本研究从单一pMHC的层次证实可溶性HLA-A2二聚体可有效的抑制同种反应的强度，并且这种抑制作用具有pMHC特异性，为诱导移植受者对移植物特异性免疫耐受提供新的思路。