茶多酚对小鼠离体脑片氧糖剥夺及谷氨酸损伤的神经保护作用

摘要

目的：研究茶多酚（TP）（1、3、10mg/L）对小鼠离体脑片氧糖剥夺（OGD）损伤及谷氨酸(Glu)损伤的神经保护作用并探讨其作用机制。 方法：采用健康、成年昆明种小鼠，通过使脑片遭受OGD损伤（皮层15min、海马10min），接着复灌60min，建立皮层、海马脑片OGD损伤模型；通过在孵育液中加入1mM的Glu损伤30min，建立皮层、海马脑片Glu损伤模型。TTC染色法和检测脑片在孵育液中LDH释放量用于评价脑片神经损伤的程度。此外，脑片SOD活力的测定用于评价TP对OGD损伤脑片抗氧化损伤能力的影响。并比较了含镁离子、无镁离子人工脑脊夜（ACSF）、TP（10mg/L）与MK801（0.03mM）对Glu 损伤全脑脑片活性的影响。 结果： 1.TP 对OGD 损伤小鼠皮层、海马脑片TTC染色及LDH 释放量的影响:空白对照组皮层、海马脑片TTC染色490nm 处吸光度值（A490）分别为0.35±0.02（n=8)、0.18±0.01（n=10)，LDH释放量分别为187.42±14.17U/mg·tissue（n=8）、106.32±8.61 U/mg·tissue（n=8）。与空白对照组比较，OGD15min 或10min，可以显著降低皮层、海马脑片TTC 染色A490，分别为0.13±0.01（p<0.01，n=8），0.08±0.01（p<0.01，n=10）；也可显著增高其LDH 释放，分别为271.00±18.24U/mg·tissue（p<0.01，n=8），179.48±3.85U/mg·tissue（p<0.01，n=8）。而TP（1、3、10mg/L）则可以明显提高OGD损伤皮层、海马脑片TTC 染色A490，同时也能明显降低其LDH释放。 2.TP 对OGD损伤小鼠皮层、海马脑片SOD活力的影响：空白对照组皮层、海马脑片SOD活力分别为115.58±5.19U/mgprot（n=8）、114.31±4.82U/mgprot（n=8）。OGD15 或10min后，脑片SOD活力显著降低，分别为74.30±6.42U/mgprot（p<0.01，n=8）、59.38±4.50U/mgprot（p<0.01，n=8）。而TP（1、3、10mg/L）则可剂量依赖性地明显提高OGD损伤脑片SOD 活力，并且，TP（10mg/L）升高SOD活力分别到158.17±10.62U/mgprot（n=8）、126.52±2.39U/mgprot（n=8），比相应空白对照组更高（皮层脑片p<0.01、海马脑片p<0.05）。 3.TP对Glu损伤小鼠皮层、海马脑片TTC染色及LDH释放量的影响:空白对照组皮层、海马脑片TTC染色A490分别为0.20±0.01（n=8）、0.13±0.005(n=8),LDH释放量分别为196.15±29.49U/mg·tissue（n=8）、119.94±9.93 U/mg·tissue（n=8）。与空白对照组比较，1mM的Glu损伤30min 可以显著降低皮层、海马脑片TTC染色A490，分别为0.13±0.01（p<0.01，n=8）；0.08±0.005（p<0.01，n=8）；也可显著增高其LDH 释放量，分别为368.73±30.14U/mg·tissue（p<0.01，n=8）；217.19±8.32U/mg·tissue（p<0.01，n=8）。而TP（1、3、10mg/L）可稳定增加Glu损伤皮层、海马脑片的活性。TP对皮层脑片TTC染色的影响呈现出一定的剂量依赖性关系。 4.含镁离子、无镁离子ACSF、MK801 及TP 对Glu 损伤小鼠全脑脑片TTC 染色的影响：1mM、3mM的Glu损伤30min 可剂量依赖性地降低小鼠全脑脑片TTC 染色A490。含镁离子空白对照组脑片A490为0.48±0.02，Glu1mM、Glu3mM 损伤组A490分别降到0.40±0.02（与含镁空白对照组比p<0.05，n=6）、0.31±0.03(与含镁空白对照组比p<0.01,n=6)，而用无镁离子ACSF 孵育的脑片活性均低于相应用含镁离子ACSF孵育的脑片活性（p<0.01）。TP（10mg/L）与MK801（0.03mM）对Glu3mM损伤脑片呈现出相似的显著保护作用。并且，TP（10mg/L）对Glu3mM损伤脑片的保护率为1.40±0.07（含镁组），1.44±0.07（无镁组），两者比较，无显著性差异（p>0.05）。同样，MK801（0.03mM）对Glu3mM损伤脑片的保护率，含镁组与无镁组之间比较，也无显著性差异（p>0.05）。 结论： 1.TP（1、3、10mg/L）对OGD损伤及Glu损伤小鼠离体脑片具有明显的神经保护作用，其保护作用可能与提高脑片组织SOD活力有关，也可能与减弱由NMDA受体兴奋所引起的神经元兴奋性毒性损伤有关。 2.含镁离子ACSF所提供的离子环境更适合脑片存活。在小鼠离体脑片水平，TP（10mg/L）对Glu损伤脑片产生的保护作用与MK801（0.03mM）产生的相当，它们产生的保护作用均不受含镁离子ACSF、无镁离子ACSF 这两种孵育液的影响。