可溶性HLA-G二聚体抑制同种T细胞应答的研究

摘要

MHC型别不同的供/受者间进行移植后会发生强烈的排斥反应，其机制主要是同种反应性T细胞（简称同种T细胞）识别同种异体组织抗原（简称同种抗原）并产生应答。大量免疫抑制剂的应用过度的抑制了机体的免疫系统，使受者处于罹患严重感染的风险之中，因而诱导同种异体耐受成为亟待解决的问题。HLA-G是一种非经典的HLAⅠ类分子，其限制性的组织分布、有限的基因多态性提示其为一种诱导免疫耐受的分子。体外研究资料显示HLA-G通过与抑制性受体的结合诱导T、B、NK、DC、巨噬细胞等免疫细胞的免疫耐受，临床病例研究也显示HLA-G阳性的受者与阴性受者相比，急性排斥期缩短，慢性排斥发生率降低。最新研究表明HLA-G二聚体形式对于HLA-G与抑制性受体的结合以及生物学功能的发挥都起着至关重要的作用。本研究采用基因工程技术构建并制备了可溶性HLA-G二聚体，并利用混合淋巴细胞培养模型研究了该分子抑制同种T细胞应答的作用。论文分为2个部分，主要内容与结果如下： 一﹑可溶性HLA-G二聚体的制备 本研究利用基因工程技术将编码HLA-G重链胞外段（α1-α3区）的基因与编码人IgG-Fc段的基因融合插入到真核表达载体pcDNA3.1+中形成pcDNA3.1+[sHLA-G/IgG] 质粒。通过电穿孔技术将质粒导入HLAⅠ类分子和IgG重链缺陷的721.221细胞中表达，筛选出高效表达的稳定转染子（dimer-721.221），经特异性ELISA和western blotting鉴定表达的HLA-G/IgG融合蛋白具有正确的分子量和空间构象，并通过IgG-Fc段形成了二聚体，将该融合蛋白命名为可溶性HLA-G二聚体。 二﹑可溶性HLA-G二聚体抑制同种T细胞应答的研究 本研究利用灭活的T1与HLA阴性的健康人外周血淋巴细胞的混合淋巴细胞培养模型模拟同种反应，研究了HLA-G二聚体抑制同种T细胞应答的作用。结果显示，HLA-G二聚体在纳摩尔水平抑制同种T细胞应答：抑制同种反应性CD8+、CD4+T细胞的活化和增殖，抑制同种CTL细胞的产生，并且这种抑制作用比HLA-G单体要强。此外，HLA-G二聚体还可上调同种反应性CD8+T细胞表面ILT2的表达，而这种作用又可进一步促进HLA-G二聚体的抑制功能。鉴于HLA-G二聚体与受体的高亲和力以及抑制同种T细胞应答的高效率，该分子可望应用于HLA-G/受体的结合研究以及诱导同种移植耐受。 本研究的创新点和意义: 1.本研究首次利用基因工程技术构建、表达了可溶性HLA-G二聚体，证实了该分子在纳摩尔水平抑制同种反应性T细胞的活化和增殖、抑制同种CTL的产生； 2.本研究首次将HLA-G二聚体与HLA-G单体在抑制同种反应性T细胞增殖方面的功能进行了比较，并证实HLA-G二聚体比单体更高效； 3.本研究首次报导了HLA-G在蛋白水平上调同种反应性CD8+T细胞表面ILT2的表达，这种上调作用又可进一步促进HLA-G二聚体的功能； 本研究制备的HLA-G二聚体将有利于HLA-G/受体的结合研究，并应用于诱导同种移植耐受。