脂肪肝中mfn2的表达变化及其对线粒体形态功能的影响

摘要

目的：1.研究脂肪肝中线粒体功能变化与mfn2基因表达的关系以及线粒体外形的动态变化与能量产生之间的联系。2. 研究外源性mfn2对脂肪肝细胞内线粒功能的影响。
　　 方法：ob/ob小鼠建立脂肪肝模型，荧光素酶ADP/ATP 发光法检测细胞中ATP产量，荧光探针DCFH-DA 测定ROS 生成水平；RT-PCR 测定mfn2基因转录，Western-blot 测定Mitofusin 2蛋白表达情况，原代细胞免疫细胞荧光共聚焦检测线粒体形态变化等指标，与对照组比较并行相关性分析。利用脂质体2000 将质粒mfn2转染LO2细胞，荧光素酶ADP/ATP 发光法检测细胞中ATP 产量，荧光探针DCFH-DA 测定ROS 生成水平；RT-PCR 测定mfn2基因转录，Western-blot 测定Mitofusin 2蛋白表达情况，JC-1 标记细胞线粒体，在流式细胞仪上检测线粒体跨膜电位(ψ m △)的变化。
　　 结果：在脂肪肝中，ATP 生成率下降，ROS 产物增多，mitofusin2表达低于对照组肝组织，且在转录水平(mfn2)出现表达下调。转染mfn2基因的LO2细胞可以稳定表达mfn2蛋白，在脂肪肝诱导的情况下,转染组ATP 水平高于对照组，ROS 低于对照组，线粒体跨膜电位下降幅度少。
　　 结论：脂肪肝中mitofusin2 下调导致细胞中线粒体融合出现障碍，形态学上表现为线粒体从丝状网络断裂成点状碎片，功能学上提示线粒体代谢出现障碍。而在细胞试验中上调mfn2基因表达可以减弱因脂肪肝诱导所致的细胞中线粒体能量代谢水平下降。