槲皮素对兔缺血再灌注心肌NOX、NOS基因和蛋白表达的影响

摘要

本研究分为二部分：
　　 第一部分：两种兔可控性急性心肌缺血再灌注模型的比较
　　 目的：完善兔可控性急性心肌缺血再灌注(I/R)动物模型的制备,提高模型成功率和动物成活率。
　　 方法：成年健康家兔60只，随机分为假手术组30只(Sham组)、I/R1组15只和I/R2组15只。Sham组仅穿线不接扎，I/R1组选择左冠状动脉前降支，I/R2组选择冠状动脉左缘支。开胸后以5-0 prolene线穿过冠状动脉，硅胶管圈套5-0 prolene线，用血管钳收紧硅胶管阻断冠状动脉血流，制备兔可控性心肌缺血再灌注模型。四肢安装肢体导联，通过心电图ST段的改变作为心肌缺血的评定指标。
　　 结果：Sham组30只动物手术前后心电图均无变化；I/R1组结扎后，13只动物ST段无明显变化；2只动物ST段轻度压低，再灌注时无心律失常表现；I/R2组15只动物结扎后ST段均抬高明显，并渐与QRS波融合，QRS波幅随着时间的延长逐渐变小，再灌注时11只出现室性早搏，4只出现室性心动过速。
　　 结论：兔可控性心肌缺血再灌注模型应选择冠状动脉左缘支。用血管钳收紧硅胶管圈套5-0 prolene线的方法可以准确地复制兔心肌缺血再灌注的实验模型,简化实验操作步骤。
　　 第二部分：槲皮素对兔缺血再灌注心肌NOX、NOS基因和蛋白表达的影响
　　 背景：过去大量的实验表明，活性氧簇(ROS)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)参与心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的病理生理过程。NOX家族NADPH 氧化酶是一类能产生过氧化物、ROS的蛋白质。研究表明，槲皮素对MIRI有很好的保护作用。
　　 目的：本实验旨在观察槲皮素对兔缺血再灌注心肌NOX、NOS基因和蛋白表达的影响。
　　 方法和结果：建立成年家兔心肌缺血再灌注模型，结扎左缘支30分钟，再灌注12小时。实验分4组：空白对照组(control)、缺血再灌注组(I/R)、槲皮素组(Que)、槲皮素+缺血再灌注组(I/R+Que)。用Real Time-PCR和Western blot方法检测心肌NOX2、eNOS、iNOS基因和蛋白的表达。I/R组NOX2、iNOS基因和蛋白表达水平明显增高(P<0.01),eNOS变化不明显(P<0.01)。给予槲皮素后，Que和I/R+Que组NOX2、eNOS、iNOS基因和蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。
　　 结论：心肌缺血再灌注后，NOX2、iNOS表达增加；槲皮素明显减少心肌缺血再灌注后NOX2、iNOS、eNOS的表达。