P-糖蛋白在人乳腺癌细胞MCF-7/ADM线粒体上的定位研究

摘要

目的：本实验以人乳腺癌细胞株MCF-7及阿霉素耐药株MCF-7/ADM为研究对象，建立分离纯化肿瘤细胞线粒体的方法，探讨多药耐药基因产物P-糖蛋白(P-glycoprotein，P-gp)在乳腺癌细胞线粒体上的定位与表达，为进一步研究线粒体与肿瘤细胞耐药、抗凋亡的关系提供理论依据。
　　 方法：1. 建立稳定传代的抵抗阿霉素的人乳腺癌细胞株MCF-7/ADM,采用MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性；
　　 2. 应用共聚焦激光显微镜(Confocal)检测乳腺癌细胞株MCF-7及阿霉素耐药株MCF-7/ADM 线粒体上P-gp的定位；
　　 3.通过蔗糖密度梯度离心法提取肿瘤细胞线粒体，提取物经电镜鉴定；蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测乳腺癌细胞株MCF-7及阿霉素耐药株MCF-7/ADM线粒体上P-gp的表达。
　　 结果：1. 成功建立了对阿霉素耐药的人乳腺癌细胞株MCF-7/ADM，MTT结果显示MCF-7/ADM对MCF-7的耐药倍数为65.12倍；
　　 2. 免疫荧光共聚焦激光显微镜观察到阿霉素耐药株MCF-7/ADM中P-gp和线粒体存在共定位现象；
　　 3.电镜结果显示，提取得到纯化且完整的人乳腺癌细胞线粒体；蛋白免疫印迹结果亦证实从耐药株MCF-7/ADM中提取线粒体蛋白质，在分子量170KDa处有一特异性条带。
　　 结论：蔗糖密度梯度离心法可用于制备肿瘤细胞线粒体；P-gp表达于阿霉素耐药细胞株MCF-7/ADM的线粒体上，敏感株MCF-7未见P-gp表达。线粒体P-gp的作用可能是在亚细胞水平介导肿瘤耐药。