内源性哇巴因在弱精子症发病机理中作用的初步探索

摘要

本研究分为三部分：
　　 实验一、Ouabain及其受体NKA-α1抗体、NKA-α4抗体对正常人精子运动功能的影响
　　 目的：研究Ouabain 及其受体NKA-α1抗体、NKA-α4抗体对正常人精子运动功能的影响。
　　 方法：按世界卫生组织标准选取正常精液标本60例，上游法进行优化，其中30例分别与不同浓度（1×10-2 M～1×10-7 M）Ouabain 共孵育，采用CASA系统检测精子运动功能的变化，观察指标为a+b 级精子百分率、精子活动率、直线速度、鞭打频率、直线性、前向性、摆动性等；另外30例分别与NKA-α1 抗体和NKA-α4 抗体共孵育，CASA检测精子运动功能的变化，观察指标同上。
　　 结果：1、Ouabain对精子活动率和a+b 级精子百分率的影响呈现出一定的时效性，随着时间的延长有逐渐降低的趋势；较高剂量（1×10-2 M～1×10-5 M）Ouabain与优化后的精子共孵育4h后，精子活动率下降了62.7%～68.4%，与阴性对照组相比差异有显著性（p<0.05），a+b 级精子百分率下降了81.5%～85.7%，与阴性对照组相比差异有极显著性（p<0.01），但两参数4个剂量组间变化无统计学意义（p>0.05）；较低剂量（1×10-6 M和1×10-7 M）Ouabain与优化后的精子共孵育后，精子活动率及a+b 级精子百分率分别下降了27.2±3.7%和24.5±2.9%，与阴性对照组比较差异无显著性（p>0.05）；其余精子运动参数包括曲线速度、鞭打频率、侧摆幅度、平均位移角度均未见明显变化。2、①加入Anti-α1和Anti-α4后的精子活动率分别下降了28.1±2.8%和32.9±3.4%，与对照组相比差异均有极显著性（p<0.01）；但Anti-α1和Anti-α4两者间的差异无显著性（p>0.05）；②加入Anti-α1和 Anti-α4后的a+b 精子百分率分别下降了38.7±3.8%和53.2±4.4%，与对照组相比差异均有极显著性（p<0.01）；与Anti-α1 相比，Anti-α4的作用更明显（p<0.01）。③其它运动参数如曲线速度、鞭打频率、侧摆幅度、平均位移角度均未见显著性变化。
　　 结论：Ouabain 及其受体NKA-α1、NKA-4 多克隆抗体能显著减低体外培养正常人精子的运动能力，主要影响精子活动率和a+b 级精子百分率即精子直线运动能力；与NKA-α1 抗体相比较，NKA-α4抗体对精子运动能力的影响作用更明显，在精子运动能力的调控中发挥更为主要的作用。
　　 实验二、正常男性及弱精子症患者精浆中EO水平的比较性研究
　　 目的：检测正常男性、轻度及重度弱精子症患者精浆中EO含量，初步探讨EO与弱精子症及病程的相关性。
　　 方法：按世界卫生组织标准选取60例正常精液标本，另外选取60例轻度弱精子症和60例重度弱精子症精液标本，采用自制的抗Ouabain 多克隆抗体，运用竞争性ELISA法检测精浆中EO的水平。
　　 结果：轻度及重度弱精子症患者精浆中EO水平分别为25.27±1.71 μg/L和26.52±1.82 μg/L，明显高于正常男性精浆水平19.32±1.45 μg/L，差异均具有极显著性（p<0.01）；与轻度弱精子症相比较，重度弱精子症患者精浆中EO 水平呈继续升高的趋势，但差异无显著性（p>0.05）。
　　 结论：EO在弱精子症患者精浆中的水平明显升高，且与疾病的病程可能呈现一定的正相关性，结合实验一结果表明，EO可能参与了精子运动能力的调控，EO/NKA可能是弱精子症病理调控的新途径。
　　 实验三、EO在正常大鼠和弱精子症大鼠睾丸中的表达
　　 目的：检测EO在正常和弱精子症SD大鼠睾丸中的表达和表达特征，探讨EO和弱精子症的相互调节关系。
　　 方法：选择正常SD大鼠和弱精子症SD大鼠各10只；制作睾丸石蜡切片，采用自制抗Ouabain 多克隆抗体，运用免疫组织化学S-P法检测EO在两组大鼠睾丸中的表达。
　　 结果：EO表达于正常组、弱精子症组SD大鼠睾丸组织的间质细胞和相对成熟的生精细胞（圆形精子细胞、长形精子细胞等）的胞质和胞膜上；弱精子症组EO的表达明显增强（p<0.01）。
　　 结论；EO在正常和弱精子症SD大鼠睾丸中表达，表达强度的差别表明EO可能参与了弱精子症的病理调控过程。