壳聚糖-pGU6/GFP/Neo-shSTA纳米粒沉默stathmin基因对肺腺癌细胞化疗敏感性的影响

摘要

目的：观察以天然纳米材料壳聚糖包裹stathmin基因短发夹RNA（shRNA）表达质粒介导转染肺腺癌细胞A549,是否增强细胞对化疗药物紫杉醇的敏感性，为壳聚糖纳米载基因颗粒在肺腺癌生物学治疗中的应用提供依据。
　　 方法：构建靶向stathmin基因的短发夹RNA（shRNA）真核表达质粒，并酶切、测序鉴定；脂质体介导转染A549细胞，RT-PCR、Western Blot方法检测该质粒对靶基因的沉默效能；采用复凝聚法合成靶向stathmin的壳聚糖-shRNA纳米粒；分别以壳聚糖-shRNA纳米粒、阳离子脂质体基因复合物转染A549细胞，MTT法检测细胞对化疗药物紫杉醇敏感性的变化。
　　 结果：成功构建了靶向stathmin基因的shRNA真核表达质粒pGU6/GFP/Neo-shSTA；转染A549细胞后stathmin基因的mRNA、蛋白质表达水平较对照组均显著降低（P<0.05）；成功制备了靶向stathmin的壳聚糖-shRNA纳米粒；该纳米粒转染A549细胞后在细胞内可检测到报告基因（GFP）的明显表达；壳聚糖-shRNA纳米粒、阳离子脂质体基因复合物转染A549细胞组与空白对照组相比，半数抑制率（IC50）均显著降低（P<0.05)，壳聚糖组降低的程度小于脂质体组（P<0.05)。
　　 结论：质粒pGU6/GFP/Neo-shSTA能高效靶向沉默stathmin基因的表达；本实验制备了壳聚糖纳米载基因颗粒，成功转染了A549细胞；靶向stathmin的壳聚糖-shSTA纳米粒转染肺腺癌细胞，能显著增强细胞对化疗药物紫杉醇的敏感性；壳聚糖介导shRNA转染对A549细胞的紫杉醇敏感性提高的程度低于脂质体。

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综述 壳聚糖及其衍生物作为基因递送载体的研究进展

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