NDRG1在宫颈癌中的表达及其生物学特性和调节机制的研究

摘要

第一部分 NDRG1表达上调对宫颈癌细胞Siha增殖与周期的影响
　　 目的：探讨表达质粒转染细胞使人N-myc下游调节基因1（N-myc downstream regulated gene 1, NDRG1）表达上调后对宫颈癌细胞Siha增殖、周期及凋亡的影响。
　　 方法：通过RT-PCR检测宫颈组织标本和宫颈癌细胞中NDRG1的Mrna表达水平，宫颈组织标本包括正常宫颈组织19例，宫颈上皮内瘤样病变（cervicAlintraepitheliAlneoplasia, CIN）18例，宫颈癌组织63例；宫颈癌细胞包括Siha、Hela。构建真核表达质粒Pegfp-N1-NDRG1，由脂质体介导将表达质粒稳定转染到宫颈癌细胞株Siha中，用RT-PCR和Western blot鉴定NDRG1的表达，MTT法描绘细胞生长曲线，流式细胞仪检测细胞凋亡率及细胞周期的改变。
　　 结果：正常宫颈组织和CIN的NDRG1Mrna表达水平明显高于宫颈癌组织和细胞（P<0.001）。重组质粒Pegfp-N1-NDRG1转染Siha细胞后，NDRG1Mrna表达增加了（1.73±0.23）倍，蛋白表达水平增加了（1.27±0.82）倍（P<0.001）。NDRG1表达上调后细胞生长速度减慢（P<0.001），细胞在G1期发生细胞周期阻滞和S期细胞减少（P<0.05），细胞凋亡率无明显变化（P>0.05）。
　　 结论：真核表达质粒Pegfp-N1-NDRG1能特异性增加NDRG1基因表达，NDRG1表达上调后能抑制宫颈癌细胞的生长，发生细胞周期阻滞，但是对细胞凋亡无明显影响。
　　 第二部分 NDRG1表达上调对体外宫颈癌细胞Siha侵袭转移的影响
　　 目的：探讨人类N-myc下游调节基因1（N-myc downstream regulated gene 1, NDRG1）表达上调后对宫颈癌细胞Siha侵袭转移、血管生成和细胞粘附力的影响。
　　 方法：真核表达质粒Pegfp-N1-NDRG1由脂质体介导稳定转染到宫颈癌细胞株Siha使NDRG1基因表达上调，Transwell体外侵袭实验和迁移实验检测细胞的侵袭和迁移能力。Western blot法检测血管生成因子VEGF和细胞粘附分子E-cadherin的蛋白表达变化。
　　 结果：重组表达质粒Pegfp-N1-NDRG1转染Siha细胞后，体外侵袭实验和迁移实验显示细胞侵袭力下降（31.71±0.11）％，迁移能力下降（30.43±0.05）％（P<0.05），在蛋白水平上VEGF明显下降和E-cadherin明显增高（P<0.001）。
　　 结论：NDRG1表达上调后能抑制宫颈癌细胞的侵袭和转移能力，使血管生成因子和细胞粘附分子的蛋白表达明显下降或增高，提示NDRG1可能在宫颈癌侵袭转移中起重要作用。为宫颈癌的靶向治疗提供实验依据。
　　 第三部分 NDRG1与Egr1在信号转导通路中表达调控机制的实验研究
　　 目的：探讨人宫颈癌细胞中N-myc下游调节基因1（N-myc downstream regulated gene 1, NDRG1）与早期生长反应基因1（early growth response gene 1, Egr1）在信号转导通路中表达调控的关系。
　　 方法：以人宫颈癌细胞株Siha为研究对象，利用siRNA干扰技术对Egr1基因进行沉默，RT-PCR和Western blot检测Egr1基因沉默效果。通过Western blot检测细胞在低氧条件下Egr1与NDRG1的蛋白表达变化，以及RT-PCR检测细胞转染siRNA-Egr1后在低氧与低氧模拟物（如铁螯合剂deferoxamine, DFX）条件下，Egr1与NDRG1的表达变化。
　　 结果：siRNA-Egr1能有效抑制Egr1基因表达（P<0.001）。在低氧条件下，Egr1和NDRG1的蛋白水平均明显升高（P<0.001）。转染siRNA-Egr124h后，细胞重新在低氧条件下作用，结果Egr1Mrna表达显著下降（P<0.05）。转染siRNA-Egr124h后，细胞在低氧及低氧模拟物（如铁螯合剂deferoxamine, DFX）条件下作用24h，结果显示与低氧条件比较DFX能够使NDRG1Mrna表达显著升高（P<0.05）。同时沉默Egr1基因后能够使NDRG1Mrna水平明显减少（P<0.05）。
　　 结论：体内环境因素如低氧、低氧模拟物（deferoxamine, DFX）等上调NDRG1基因的表达，通过Egr1调节途径参与了其在宫颈癌细胞中的表达。

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文摘

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论文说明：中英文缩略词表

声明

前言

第一部分NDRG1表达上调对宫颈癌细胞Siha增殖与周期的影响

第二部分NDRG1表达上调对体外宫颈癌细胞Siha侵袭转移的影响

第三部分NDRG1与Egr1在信号转导通路中表达调控机制的实验研究

综述：N-myc下游调节基因1与肿瘤的关系

附录：攻读博士学位期间发表的论文

致谢