建立人骨髓增生异常综合征细胞株SKM-1荷瘤小鼠模型

摘要

目的：探讨使用MDS细胞株SKM-1来建立MDS荷瘤小鼠模型。
　　 方法：我们常规培养MDS细胞株SKM-1细胞；取对数生长期的SKM-1细胞，以1×108/ml的细胞浓度进行接种。裸鼠（BALB/CA-nu/nu）分为3批，均为4周龄左右。第一批共10只裸鼠，每只接种0.1ml、约1.0×107个细胞于右肩胛皮下。第二批共15只裸鼠，接种细胞数量为每只0.2ml、约2.0×107个细胞于右肩胛皮下，每只裸鼠在注射细胞前24小时内接受400cGy的直线加速器全身照射，剂量率200cGy/min。无菌环境中解剖成瘤小鼠，取出皮下肿瘤，匀浆后培养。第三批裸鼠共15只。取对数生长期的肿瘤细胞，以1.0×108/ml的细胞浓度，每只接种0.2ml于4周龄左右的裸鼠右肩胛皮下，每只裸鼠仍然于注射细胞前24小时内接受400cGy的直线加速器全身照射。
　　 结果：第一批裸鼠成瘤率为0（0/10），第二批裸鼠成瘤率约为13.3％左右（2/15），第三批裸鼠成瘤率约为53.3％左右（8/15）。皮下肿瘤成瘤率第三组明显高于第一组（P=0.005），也高于第二组（P=0.020）为了获得生物学性能稳定的动物模型，我们分析鉴定了荷瘤组织的来源及其生物学特性，结果：
　　 （1）组织病理学：HE染色显微镜下可见肿瘤中央有坏死组织，周围有炎性细胞浸润瘤细胞排列杂乱，不规则，核深染，核浆比例大，高倍镜下可见瘤细胞排列杂乱无章，核深染，核浆比大，可见核分裂相。
　　 （2）流式细胞术免疫学：荷瘤细胞表面免疫表型CD3、CD5、CD7、CD14均<1％，CD13：38.41％，HLA-DR：45.06％，与接种的人MDS细胞株SKM-1特性相符合。
　　 （3）荷瘤细胞染色体检测显示：分析荷瘤组织染色体发现与MDS细胞株SKM-1细胞染色体特性相符合，表现为多倍体、超三倍体多见，涉及多个染色体的缺失异常如del（1q）、del（1p）、del（2p）、del（4p）、del（5q）、del（6q），涉及9号染色体的异常der(9)add(q34)del(p21)，涉及15号染色体异常如add（15p）等等，还有+1、+2、+3、+4、+5、+7、-8、+9、+10、+11、+13、-14、+15、+16、+17、+18、+21、+22等等染色体异常。而裸鼠染色体（2n=40）均为端着丝粒染色体，易与荷瘤细胞染色体区分。
　　 （4）免疫组织化学检测显示：肿瘤组织强表达突变型P53蛋白。经上述病理组织学、流式细胞免疫学，免疫组织化学，细胞遗传学等综合分析，证实荷瘤组织保持了SKM-1细胞系的生物学特征，来源为人源性的，与MDS细胞株SKM-1细胞特性相符合。
　　 结论：成功的建立了用MDS细胞株SKM-1建立荷瘤小鼠模型，为进一步研究MDS的发病机制、筛选治疗MDS的药物以及探讨其药物的作用机制提供实验动物模型。

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参考文献

综述 MDS的治疗：历史回顾与展望

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