胰岛素与β-淀粉样蛋白寡聚体的共同作用对磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白影响的实验研究

摘要

第一部分
　　 不同浓度β-淀粉样蛋白寡聚体对磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白的影响及机制
　　 目的：
　　 探讨不同浓度的β淀粉样蛋白（amyloid beta，Aβ）寡聚体（Aβ-derived diffusible ligands，ADDLs）的对磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白的影响及机制。
　　 方法：
　　 0.5μmol/L,1μmol/L,1.5μmol/L,2μmol/L,2.5 μmol/L,3μmol/L的Aβ1-42寡聚体分别作用于体外培养的PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)3h,6h,12h,24h,36h和48h,western blot检测钙蛋白酶（calpain）的激活程度,蛋白激酶A的催化亚基（catalytic subunit of cAMP-dependent kinase，PKA-C）和磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（phosphorylated cAMP response element binding protein，pCREB）的蛋白表达变化。
　　 结果：
　　 所有浓度的ADDLs均导致pCREB的下降（P<0.05），但均未影响PKA-C的含量
　　 （P>0.05）。0.5μmol/L,1μmol/L,1.5μmol/L的ADDLs导致pCREB的下降与calpain的激活无关，而2μmol/L,2.5 μmol/L,3μmol/L的ADDLs导致pCREB的下降与calpain激活相关。
　　 结论：
　　 不同浓度ADDLs通过不同毒性通路导致pCREB下降：高浓度的ADDLs通过激活calpain，而低浓度ADDLs则可能通过其他途径，但两者均未通过影响PKA-C的含量来降低pCREB水平。
　　 第二部分
　　 胰岛素与β-淀粉样蛋白寡聚体的共同作用对磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白的影响
　　 目的：
　　 探讨胰岛素与不同浓度的β淀粉样蛋白（amyloid beta，Aβ）寡聚体（Aβ-derived diffusible ligands，ADDLs）的共同作用对磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白的影响。
　　 方法：
　　 选取0.5μmol/L和2μmol/L的ADDLs分别与100nmol/L和1μmol/L的胰岛素共同作用于体外培养的PC12细胞(大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞)12h,western blot检测钙蛋白酶（calpain）的激活程度,蛋白激酶A的催化亚基（catalytic subunits of cAMP-dependent kinase，PKA-C）和磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白（phosphorylated cAMP response element binding protein，pCREB）的蛋白表达变化，并与胰岛素单独作用，ADDLs单独作用时进行比较。
　　 结果：
　　 （1） 胰岛素单独作用于PC12细胞时，无论大小剂量，与对照组相比，对calpain激活无影响（P>0.05），在约处理30分钟时有短暂的pCREB水平升高（P<0.05），之后pCREB迅速回落至正常水平。
　　 （2） 不同浓度的ADDLs作用与PC12细胞：见前述。
　　 （3） 胰岛素与ADDLs共同作用时：0.5μmol/L和2μmol/L ADDLs分别与100nmol/L和1μmol/L胰岛素共同作用12h。与0.5μmol/L和2μmol/L ADDLs单独作用12h相比，100nM胰岛素的共同作用对calpain激活和pCREB水平无影响（P>0.05）；与0.5μmol/L ADDLs共同作用时，1μM胰岛素能部分恢复pCREB的下降（P<0.05）,对calpain激活无影响（P>0.05）；与2μmol/L ADDLs共同作用时，1μM胰岛素加剧了calpain的激活（P<0.05）与pCREB的下降（P<0.05）。
　　 （4） PKA-C的含量在各组均无变化（P>0.05）。
　　 结论：
　　 胰岛素与不同浓度ADDLs共同作用长时间时，其是逆转还是加重ADDLs引起的pCREB下降依赖于不同浓度ADDLs自身引起pCREB下降的机制：当ADDLs浓度低，通过不激活calpain来降低pCREB时，胰岛素起到神经保护作用，部分逆转pCREB的下降；当ADDLs浓度高，通过激活calpain来下调pCREB时，胰岛素则加重了calpain激活和pCREB下降，促进了ADDLs的毒性。

目录

文摘

英文文摘

前 言

第一部分不同浓度β-淀粉样蛋白寡聚体对磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白的影响及机制

第二部分胰岛素与β-淀粉样蛋白寡聚体的共同作用对磷酸化环磷酸腺苷反应元件结合蛋白的影响

全文小结

综述糖尿病与阿尔茨海默病之间联系的研究进展

附录攻读硕士学位期间发表论文

致 谢